第２５卷第４期 淮海工学院学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕａｉｈａｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖｏ１．２５ Ｎｏ．４ Ｄｅｃ．２０１６ ２０１６年１２月 ｌ专题研究ｌ ｌ＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝ 主持人孟学平教授：实时荧光定量ＰＣＲ技术１９９６年由美国ＡＢＩ公司推出，该技术实现了ＰＣＲ从定 性到定量的飞跃。由于其具有操作简单、快速方便、灵敏度高、重复性好、污染率低等优点，被广泛应 用于医学检测、药物疗效考核、基因表达研究、基因检测、病原体检测、动植物检疫和食品检测等领 域。本期关于虾类基因的３篇研究论文，分别从脊尾白虾ＮＳＴＮ基因表达、罗氏沼虾蛋白酶Ｄ基因 克隆表达和重金属Ｈｇ对脊尾白虾线粒体基因拷贝数影响等方面，使用实时荧光定量ＰＣＲ技术对 我国主要养殖虾类的与其蜕皮、生长、饲料转化密切相关的功能基因进行定量分析，对于提示甲壳类 蜕皮的分子机理以及选育生长速度快、饲料转化率高的养殖虾类新品种具有一定指导意义。 脊尾白虾ＭＳＴＮ基因组织及不同蜕皮后时间点的表达特征 薛 蓓ｈ ，张 培ｈ ，李志辉ｈ ，赵 莲ｈ ，邰小飞ｈ， 徐 晔ｈ，赖晓芳ｈ 一 ，高 焕ｈ， 一 ，阎斌伦ｈ （１．淮海工学院ａ．海洋生命与水产学院；ｂ．江苏省海洋生物技术重点实验室 Ｃ．江苏省海洋生物产业技术协同创新中心，江苏连云港２２２００５； ２．江苏省农业种质资源保护与利用平台，江苏南京 ２１００１４） 摘 要：肌肉生长抑制素（ｍｙｏｓｔａｔｉｎ，ＭＳＴＮ）是动物肌肉生长与发育过程中重要的因子．为揭 示该基因在脊尾白虾中的生物学功能，依据克隆获得的脊尾白虾ＭＳＴＮ基因的部分序列设计引物， 采用实时荧光定量ＰＣＲ技术对脊尾白虾不同组织和不同蜕皮后时间点的表达特征进行了分析．结 果表明：ＭＳＴＮ在脊尾白虾的眼柄、鳃、心脏、肝胰腺、卵巢、胃、肠和肌肉共８个组织中均有表达，且 在眼柄、心脏和胃中表达量均高于肌肉，说明除参与肌肉生长和发育的外，ＭＳＴＮ在脊尾白虾 中还可能发挥其他作用；在不同蜕皮后时间点的表达特征分析中发现，在蜕皮后初期，脊尾白虾体内 ＭＳＴＮ的表达量显著低于蜕皮间期个体，随蜕皮后时间的延长，ＭＳＴＮ的表达量逐渐升高，说明 ＭＳＴＮ在脊尾白虾蜕皮相关的肌肉生长过程中发挥着负作用． 关键词：脊尾白虾；肌肉生长抑制素；表达特征；不同组织；不同蜕皮后时间点 中图分类号：￥９６８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２－６６８５（２Ｏ１６）０４—００６６—０５ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ（ＭＳＴＮ）Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ａｔ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｐｏｓｔ－ｍｏｌｔ Ｔｉｍｅｓ ｉｎ Ｅｘｏｐａｌａｅｍｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ ＸＵＥ Ｂｅｉ ，。～，ＺＨＡＮＧ Ｐｅｉ ，。一，ＬＩ Ｚｈｉｈｕｉ ， ， ～，ＺＨＡＯ Ｌｉａｎ ， ，ＴＡＩ Ｘｉａｏｆｅｉｈ， ＸＵ Ｙｅｈ，ＬＡＩ Ｘｉａｏｆａｎｇ ＇ ＇ ，ＧＡＯ Ｈｕａｎ ， ，ＹＡＮ Ｂｉｎｌｕｎ ， ， ＊收稿日期：２０１６—１Ｏ一１２；修订日期：２Ｏ１６一ｌ１—２２ 基金项目：江苏省科技厅农业科技支撑计划项目（ＢＥ２０１３３６３）；江苏省高校“青蓝工程”培养基金项目；江苏省普通高校研究生科研创新 计划项目（ＫＹＬＸ１５—１４８６，ＳＪＩ Ｘ１６—０６７３）；连云港市科技局产学研合作项目（ＣＸＹ１５１７）；淮海工学院江苏省海洋生物技术重 点实验室开放课题（２０１５ＨＳ００１）；江苏高校品牌专业建设工程一期项目（ＰＰＺＹ２０１５Ｂ１５９） 作者简介：薛蓓（１９９２一），女，山东日照人，淮海工学院海洋生命与水产学院硕士研究生，主要从事海洋生物繁殖与遗传育种方面的研 究，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｍａｌｖｓｙ＠ｌ６３．ｃｏｒｎ． 通讯作者：阎斌伦（１９６２一），男，江苏连云港人，淮海工学院海洋生命与水产学院教授，硕士生导师，主要从事甲壳类种质资源及繁育方 面的研究，（Ｅ—ｍａｉｌ）ｙａｎｂｌ＠ｈｈｉｔ．ｅｄｕ．ｃｎ． 第４期 薛蓓等：脊尾白虾ＭＳＴＮ基因组织及不同蜕皮后时间点的表达特征 ６７ （１．ａ．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍａｒｉｎｅ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ；ｂ．Ｊｉａｎｇｓｕ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍａｒｉｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｃ．Ｃｏ－ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍａｒｉｎｅ Ｂｉｏ－ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕａｉｈａｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ ２２２００５，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｔｈｅ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ，ｍｙｏｓｔａｔｉｎ（ＭＳＴＮ），ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ— （ＴＧＦ—Ｇ），ｉｓ ｋｎｏｗｎ ｔｏ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｇｒｏｗｔｈ．Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ（ｅｙｅｓｔａｌｋ，ｇｉｌｌ，ｈｅａｒｔ，ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｓ，ｏｖａｒｙ，ｓｔｏｍａｃｈ，ｉｎｓｔ— ｅｓｔｉｎｅｓ ａｎｄ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｍｕｓｃｌｅ）ａｎｄ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｓｔ—ｍｏｌｔ ｔｉｍｅｓ（１，５，１０ ａｎｄ １５ ｍｉｎ）ｉｎ ｔｈｅ ｒｉｄｇｅ— ｔａｉｌ ｗｈｉｔｅ ｐｒａｗｎ，Ｅｘｏｐａｌａｅｍｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ ｏｆ ＭＳＴＮ ｆｏｒ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ— ｔｉｍｅ ＰＣＲ（ｑＲＴ—ＰＣＲ）ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ＭＳＴＮ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ ｔｅｓｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ＭＳＴＮ ｓｈｏｕｌｄ ｐｌａｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｍｕｓｃｌｅ ｇｒｏｗｔｈ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｖａｒｉｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｌｅｖｅｌｓ ｅｘｉｔｅｄ ｉｎ ｈｅａｒｔ ａｎｄ ｓｔｏｍａｃｈ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｔｉｓ— ｓｕｅｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＭＳＴＮ ｔｅｎｄ ｔＯ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｗｉｔｈ ｐｒｏｌｏｎｇ ｏｆ ｔｉｍｅ ａｆｔｅｒ ｍｏｌｔｉｎｇ．Ａｔ ｔｈｅ ｖｅｒｙ ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｐｏｓｔ—ｍｏｌｔｉｎｇ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＳＴＮ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｒｉｓｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｌａｔｅｒ．Ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｒｅ— ｓｕｉｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ＭＳＴＮ ｗａｓ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｍｕｓｃｌｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ Ｅｘｏｐａｌａｅｍｏｎ ｃ乜ｒ ｃ口“ ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｅｘｏｐａｌａｅｍｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ；ＭＳＴＮ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｓｔ—ｍｏｌｔ ｔｉｍｅｓ 肌肉生长抑制素（ｍｙｏｓｔａｔｉｎ，ＭＳＴＮ）又称生长 分化因子８（ｇｒｏｗｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ８，ＧＤＦ一 ８），是转化生长因子８（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ 适应性广等优点，目前已经被作为池塘混养的主要 物种之一＿９ ．近几年有关脊尾白虾分子生物学的 研究逐渐增多，诸如卵黄蛋白原受体（ｖｉｔｅｌｌｏｇｅｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＶｇＲ）基因［１ 、ＡＤＰ核糖基化因子１口 和 ａ２一巨球蛋白基因＿１ 等与其繁殖和免疫等相关的基 ｂｅｔａ，ＴＧＦ一８）超家族的成员，在骨骼肌肉的生 长发育中起着十分重要的作用口 ］．近年来，对脊椎 动物ＭＳＴＮ基因机制的认识逐渐完善，在甲壳 类中的研究也受到了广泛关注．目前，已经在美洲海 螯虾（Ｈｏｍａｒｕｓ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ） ］、日本仿长额虾 （Ｐａｎｄａｌｏｐｓｉｓ 口ｐｏｎｉｃａ）＿４］、斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ）ｌ５ 和凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎ— 因被陆续克隆得到．为了进一步研究脊尾白虾与蜕 皮相关的肌肉生长过程中的分子机理，本研究根据 本实验室前期获得的脊尾白虾ＭＳＴＮ基因的部分 序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＸ８９３５１４）对不同组织以 及不同蜕皮后时间点的脊尾白虾体内ＭＳＴＮ基因 的表达特征进行研究，以期为揭示甲壳类蜕皮相关 ｎａｍｅｉ）¨６］等物种中克隆得到ＭＳＴＮ基因ｃＤＮＡ序 列，并且发现ＭＳＴＮ在甲壳类肌肉生长过程中发挥 调节作用．甲壳类动物的肌肉生长是以蜕皮为中心 间歇式进行的，其骨骼肌具有更强的可塑性，主要表 肌肉生长的机制提供帮助． １ 材料与方法 １．１试验材料 现在蜕皮诱导的肌肉组织的可逆性萎缩ｌ７ ］．因此， ＭＳＴＮ在脊椎动物和甲壳动物肌肉生长过程中的 分子机制可能存在差异，具体机制仍有待深入 研究． 试验用脊尾白虾取自连云港赣榆佳信水产开发 有限公司，实验室暂养７ ｄ后进行试验，暂养期间保 持连续充气，维持水温２６℃，盐度２８，ｐＨ ８．０，早晚 各投喂饵料１次，吸污换水１次． 脊尾白虾（Ｅｘｏｐａｌａｅｍｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ）隶属于 甲壳纲（Ｃｒｕｓｔａｃｅａ），十足目（Ｄｅｃａｐｏｄａ），长臂虾科 （Ｐａｌａｅｍｏｎｉｄａｅ），白虾属（Ｐａｌａｅｍｏｎ），是我国黄渤 海区域一种重要的经济虾类，具有繁殖能力强、环境 选取个体较大（体长约８ ｃｍ，体质量约３ ｇ）的 脊尾白虾３只，分别采取其眼柄、鳃、心脏、肝胰腺、 ６８ 淮海工学院学报（自然科学版） ２０１６年１２月 卵巢、胃、肠和腹部肌肉等共８个组织，用于ＲＮＡ 的提取． 选取体质量（１．６１±０．４２）ｇ、体长（６．６７±０．６１） ｃｍ个体作为不同蜕皮后时间点脊尾白虾取材．每２ 只个体为一组，共８组，置于２８ ｃｍ×１８ ｅｍ×２Ｏ ｃｍ （长×宽×高）的透明塑料箱中进行养殖，每组取材 后重新补入２只脊尾白虾，至全部取材完成．养殖期 间密切关注脊尾白虾的活动情况，分别在蜕皮后１， ５，１０和１５ ｍｉｎ取材，每个时间点各取３次，每次取 材时，同时以同一塑料箱内未蜕皮处于蜕皮问期个 体为对照．取脊尾白虾腹部肌肉用于ＲＮＡ的提取． １．２方法 １．２．１ ＲＮＡ提取及ｃＤＮＡ合成 将上述脊尾白 虾材料经液氮研磨后，使用Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒（上海生 工生物工程有限公司）提取总ＲＮＡ．经质量分数 １ 琼脂糖凝胶验证ＲＮＡ的完整性后，用第一链 ｃＤＮＡ合成试剂盒（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ， Ｔａｋａｒａ，Ｃｈｉｎａ）逆转录获得ｃＤＮＡ，一２Ｏ℃保存． １．２．２ 实时荧光定量ＰＣＲ 以上述不同组织和不 同蜕皮后时间点的脊尾白虾ｃＤＮＡ样品为模板，依 据本实验室先期获得的脊尾白虾ＭＳ丁Ｎ的部分序 列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＸ８９３５１４）设计实时荧光定 量ＰＣＲ引物，并以１８Ｓ ｒＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号： ＨＱ１７２８９４．１）为内参基因，分别进行针对ＭＳ丁Ｎ 的荧光定量分析，引物如表１所示． 表１ 实时荧光定量ＰＣＲ引物 Ｔａｂｌｅ ｌ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ＭＳＴＮ ｑｕａｎｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ 引物 序列（５ 一３ ） 功能 ＭＳＴＮ—Ｆ ＴＡＣＧＧＡＡＧＧＡＡＴＴＣＧＡＣＧＣＣ ＭＳ丁Ｎ荧光 ＭＳＴＮ Ｒ ＴＴＧＡＣＧＧＣＣＣＴＧＴＧＡＧＴＣＴＡ 定量引物 １ ８Ｓ ｒＲＮＡ—Ｆ ＴＡＴＡＣＧＣＴＡＧＴＧＧＡＧＣＴＧＧＡＡ ｌ８Ｓ ｒＲＮＡ １８Ｓ ｒＲＮＡ—Ｒ ＧＧＧＧＡＧＧＴＡＧＴＧＡＣＧＡＡＡＡＡＴ 荧光定量引物 荧光实时定量ＰＣＲ采用２Ｏ Ｌ扩增体系，其中 包括：１ ｘ ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ Ⅱ１０ ｔａＬ，１× ＲＯＸ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｄｙｅ ０．４ Ｌ，ｃＤＮＡ模板２ Ｌ，上下 游引物（１０ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ）各０．２ Ｌ，灭菌水７．２ Ｌ＿利 用ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ 荧光定量ＰＣＲ仪（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ— ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）进行扩增，ＰＣＲ程序如下：９５℃３０ ｓ； ９５。Ｃ ５ ｓ，６０。Ｃ ３ｉ ｓ，共４０个循环；以及一个绘制熔 解曲线的程序９５℃１５ ｓ，６Ｏ℃６０ ｓ，９５℃１５ ｓ． １．２．３数据分析采用比较Ｃｔ法对获得的定量结 果进行分析，用ＳＰＳＳ １６．０软件进行单因素方差分 析（Ｏｎｅ—Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ），显著性水平为Ｐ＜０．０５． ２结果与分析 ２．１ 脊尾白虾ＭＳＴＮ组织表达特征 为了探明ＭＳＴＮ在脊尾白虾体内不同组织间 的表达差异特征，利用荧光定量ＰＣＲ技术对其在眼 柄、鳃、心脏、肝胰腺、卵巢、胃、肠和腹部肌肉等８个 组织中的ｍＲＮＡ水平进行了检测．检测结果（见图 １）表明，ＭＳＴＮ在检测的８个组织中均有表达，但 不同组织中的表达量存在显著差异，其中心脏和胃 中的表达量最高，且与除眼柄外的其他组织均存在 显著性差异（Ｐ＜０．０５），其次为眼柄、肌肉和肝胰 腺，而在卵巢、鳃和肠中的表达量最低． 咖 莨 Ｏ ８ ６ ４ ２ ０ 肌肉鳃肝胰腺卵巢肠 眼柄心脏胃 组织 注：相同小写字母表示不同组织ＭＳＴＮ的表达量差异 不显著（Ｐ＞０．０５）． 图１脊尾自虾ＭＳＴＮ基因在不同组织的表达特征 Ｆｉｇ．１ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ＭＳＴＮ ｍＲＮＡ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｅ．ｃｎｒｌ，ｌｆｃｎＭｄ口 ２．２脊尾白虾蜕皮后不同时间点ＭＳＴＮ表达特征 蜕皮后不同时间点的ｑＲＴ—ＰＣＲ结果如图２所 示，脊尾白虾ＭＳＴＮ在蜕皮后的１，５，１０和１５ ｒａｉｎ 的表达量呈现随时问延长逐渐上升的趋势，在１，５ 和１０ ｍｉｎ时，ＭｓＴ』＼，的表达量均低于对照组，且在 １ ｍｉｎ和５ ｒａｉｎ与对照组均存在极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）；而在蜕皮后１５ ｍｉｎ时，脊尾白虾ＭＳＴＮ的 表达量则高于对照组． ３ 讨论 ３．１ 脊尾白虾ＭＳＴＮ的组织表达差异分析 大量研究表明，ＭＳＴＮ与肌肉生长、脂肪沉淀 及一些与肌肉有关的疾病密切相关 “］．最初 ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ等 在小鼠骨骼肌中发现ＭＳＴＮ，并且 认为其具有组织特异性．但是，随着对ＭＳＴＮ的研 第４期 薛蓓等：脊尾白虾ＭＳＴＮ基因组织及不同蜕皮后时间点的表达特征 ６９ 究深入，发现在猪和大鼠等脊椎动物中ＭＳＴＮ除 在骨骼肌中表达外，在心脏等组织中也有表达＿ｌ。。 ； 在鸡等家禽中，除在骨骼肌和心肌中有表达外，在肾 脏、脑和肠中也有少量表达ｌ１ ；鱼类ＭＳＴＮ的表达 范围则更为广泛，在鳃、肾脏、性腺、肠、脑等多个组 织中均有表达ｌｌ ．本研究结果进一步表明， ＭＳＴＮ在甲壳动物多组织中均有表达，这与在美洲 海螯虾、日本仿长额虾和斑节对虾中的结果类 似 ］，说明ＭＳＴＮ除对肌肉生长有作用外，在 其他组织中可能还发挥不同的生物学功能．然而， ＭＳＴＮ在美洲海螯虾中表达量最高的组织是腹部 肌肉和后肠＿３］，在斑节对虾心脏中表达量最高＿５］，本 研究在脊尾白虾中发现ＭＳＴＮ在心脏和胃中的表 达量显著高于肌肉． ２－５ ２ 蒌－ Ｏ．５ Ｏ ５ １０ ｌ５ 蜕壳后时间／ｍｉｎ 注：＊＊表示与对照差异极显著（Ｐ＜Ｏ．０１）． 图２脊尾白虾ＭＳＴＮ基因蜕皮不同时间点表达特征 Ｆｉｇ．２ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ＭｓＴＮ ｍＲＮＡ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｓｔ。ｍｏｌｔ ｔｉｍｅｓ ｏｆ Ｅ．ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ ３．２ 脊尾白虾ＭＳＴＮ在不同蜕皮后时间点的表达 特征分析 大量研究结果表明，在哺乳动物中ＭＳＴＮ对于 骨骼肌生长是一个负因子 。 ．同样，Ｃｏｖｉ 等ｌ２。 在黑背陆地蟹的爪部肌肉组织中发现，ＭＳＴＮ 也表现出抑制蛋白合成的功能．本研究中，通过对蜕 皮后１，５，１０和１５ ｍｉｎ脊尾白虾体内ＭＳＴＮ表达 量的分析发现，在蜕皮后初期，脊尾白虾体内 ＭＳ丁Ｎ的表达量显著低于蜕皮间期个体（Ｐ＜ ０．Ｏ１），而这一阶段正是甲壳类动物进行肌肉重塑和 生长的时期 。 ，说明ＭＳＴＮ的低表达有利于脊 尾白虾的肌肉生长；而随着蜕皮后时问的延长，脊尾 白虾在蜕皮后１０ ｒａｉｎ左右外观基本恢复正常，同时 ＭｌＳＴＮ的表达量逐渐升高，至１５ ｍｉｎ时略高于对 照组，可能是脊尾白虾蜕皮后肌肉的重塑及生长完 成后，ＭＳ丁Ｎ表达量升高来抑制蛋白的继续合成， 说明ＭＳＴＮ在脊尾白虾肌肉生长中起负作用． 然而在斑节对虾和凡纳滨对虾中，ＭＳＴＮ则表现出 对蜕皮周期中肌肉生长的正作用，抑制ＭＳＴＮ 表达后，生长速率会减缓ｌ６。］．因此，在甲壳动物中， ＭＳＴＮ可能参与到肌肉质量的，并随着蜕皮周 期的进行呈现一定的特异性表达，但具体的机 制仍需要进一步研究． 参考文献： ［１］龙定彪，张克英，陈代文，等．肌肉生长抑制素的研究进 展［Ｊ］．动物营养学报，２００７，１９（Ｓ１）：４９８—５０２． ｒ２］ＳＺＡＢＯ Ｇ，ＤＡＬＩ ＭＡＮＮ Ｇ，ＭＵＬＬＥＲ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ａ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｙｏｓｔａｔｉｎ ｇｅｎｅ ｃａｕｓｅｓ ｔｈｅ ｃｏｍｐａｃｔ （Ｃｍｐｔ）ｈｙｐｅｒｍｕｓｃｕｌａｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｍａｍｍａ— ｌｉａｎ Ｇｅｎｏｍｅ，１９９８，９（８）：６７１－６７２． ［３］ＭＡＣＬＥＡ Ｋ Ｓ，ＣＯＶＩ Ｊ Ａ，ＫＩＭ Ｈ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｍｙｏｓｔａ ｔｉｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｌｏｂｓｔｅｒ，Ｈｏｍａｒｕｓ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ： ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｏｌｔｉｎｇ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅｓ［Ｊ］．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏ— ｇＹ，Ｐａｒｔ Ａ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ＆Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１０， １５７（４）：３２８—３３７． ［４］ＫＩＭ Ｋ Ｓ，ＫＩＭ Ｙ Ｊ，ＪＥＯＮ Ｊ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒ— ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｏｓｔａｔｉｎ—ｌｉｋｅ ｇｅｎｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｈｉｇｈｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｍｕｓｃｌｅ ｔｉｓｓｕｅ ｆｒｏｍ Ｍｏｒｏｔｏｇｅ ｓｈｒｉｍｐ，Ｐａｎｄａｌｏｐｓｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，４１（１１）： ｅ８６２－ｅ８７１． ［５］ＤＥＳＡＮＴＩＳＣ，ＷＡＤＥ ＮＭ，ＪＥＲＲＹＤＲ，ｅｔ ａ１．Ｇｒｏｗ ｉｎｇ ｂａｃｋｗａｒｄｓ：ａｎ ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｈｒｉｍｐ ｏｒ— ｔｈｏｌｏｇ ｏｆ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｍｙｏｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ＧＤＦ１ １［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１１，２１４（１６）：２６７１—２６７７． ［６］ ＱＩＡＮ Ｚｈａｏｙｉｎｇ，ＭＩ Ｘｉａｏ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｚｏｎｇ，ｅｔ ａ１． ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｙｏｓｔａｔｉｎ／ ＧＤＦ１ １ ｉｎ ｓｈｒｉｍｐ，Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ［Ｊ］．Ｃｏｒｎ— ｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｐａｒｔ Ａ：Ｍｏｌｅｃ— ｕｌａｒ＆Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１３，１６５（１）：３０—３９． ［７］ＭＹＫＬＥＳ Ｄ Ｌ．Ｃｒｕｓｔａｃｅａｎ ｍｕｓｃｌｅ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ：ｍｏｌｅｃｕ— ｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｍａｓｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ ｐｒｏｐ— ｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， Ｐａｒｔ Ｂ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９７，１ｌ７ （３）：３６７－３７８． Ｅ８３ ＥＩＨＡＪ Ａ Ｊ，ＧＯＶＩＮＤ Ｃ Ｋ，ＨＯＵＬＩＨＡＮ Ｄ Ｆ．Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｌｏｂｓｔｅｒ ｌｅｇ ｍｕｓｃｌｅ ｆｉｂｅｒｓ ｏｖｅｒ ｉｎｔｅｒｍｏｌｔ ａｎｄ ｍｏｌｔ ＥＪ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｒｕｓｔａｃｅａｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９８４，４（４）：５３６— ５４５． ［９］王绪峨．脊尾白虾繁殖生物学的初步观察［Ｊ］．动物学 杂志，１９８７，２２（１）：７－１０． ７０ 淮海工学院学报（自然科学版） ２０１６年１２月 ［１Ｏ］ ＸＵ Ｗｅｎｊｕｎ。ＸＩＥ Ｊｉａｎｊｕｎ，ＳＨＩ Ｈｕｉ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｍａｔｏｄｉｎ— ｉｕｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒｉｄｇｅｔａｉｌ ｗｈｉｔｅ ｐｒａｗｎｓ，Ｅｘ— ｏｐａｌａｅｒｎｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ。ｉｎ ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ａｑｕａ— ｃｕｌｔｕｒｅ，２０１０，３００（１）：２５—３１． ［１１］ 梁俊平，李健，李吉涛，等．脊尾白虾ＶｇＲ基因克隆及 其在卵巢发育过程中的表达分析［Ｊ］．中国水产科学， ２０１６，２３（４）：８００—８１２． Ｅ１２］ ＤＵＡＮ Ｙａｆｅｉ，ＬＩ Ｊｉａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｚｈｅ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃ— ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＤＰ ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｅ ～ ｏｐａｌａｅｒｎｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ａｎｄ ａｍｍｏｎｉａ—Ｎ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｆｉｓｈ ＆Ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１６，５５（５）：１２３—１３Ｏ． ［１３］ 王有昆，刘萍，段亚飞，等．脊尾白虾（Ｅ．ｒｏｐａｌａｅｒｎｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ）ａ２－巨球蛋白ｃＤＮＡ全长的克隆和表达 分析［Ｊ］．渔业科学进展，２０１５，３６（２）：６３—７０． ［１４］ 李盈，额尔敦木图，刘图雅，等．肌肉生长抑制素基因 在不同动物中的研究进展［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１３， ４０（８）：１４ｌ一１４５． ［１５］ ＭＣＰＨＥＲＲ０Ｎ Ａ Ｃ，ＬＡⅥ ＬＥＲ Ａ Ｍ，ＬＥＥ Ｓ Ｊ．Ｒｅｇ— ｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｍａｓｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ａ ｎｅｗ ＴＧＦ－ ｐｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８７（６６２８）： ８３—９Ｏ． ［１６］ 郭丽，王天云，王俐，等．半定量反转录一聚合酶链反应 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ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，２１３（１）： １７２—１８３． ［２４］ ＨＥ Ｓｈｕｌｉｎ，ＱＩＡＮ Ｚｈａｏｙｉｎｇ，ＹＡＮＧ Ｊｉｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｍｏ— ｌｅｅｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐ３８ ＭＡＰＫ ｆｒｏｍ Ｌｉｔｏｐｅ— ｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｒｎｅｉ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｌｔ ｃｙ— ｃｌｅ ａｎｄ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ— ｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３，４１（２）：２１７ ２２】． （责任编辑：姚兴存）
