板书6 实验六 考马斯亮兰G250染色法测定人体血清蛋白含量

实验六 考马斯亮兰G250染色法测定人体血清蛋白含量

实验目的：

1、熟练掌握分光光度仪的规范化操作程序和注意事项；

2、掌握考马斯亮兰染色法定制牛血清蛋标准曲线的原理和操作注意事项；

3、对比双缩脲法、Folin法测定蛋白含量，分析，总结考马斯亮兰染色法测定蛋白含量的优、缺点。

实验原理

考马斯亮兰染色法定制牛血清蛋标准曲线的原理

实验操作

1、考马斯亮兰染色法定制牛血清蛋白标准曲线； （1）准确配制100ug/ml牛血清蛋白标准溶液； （2）按下表进行牛血清蛋白标准曲线加样操作；

（3）按下表进行标准曲线定制及样品测定加样操作及OD值测定；

（4）微机数据处理：确定回归方程，定制考马斯亮蓝染色法牛血清蛋白标准曲线。

表1 考马斯亮蓝染色法定制牛血清蛋白标准曲线及人体血清蛋白测定加样操作和OD值测定表 管 号. 项 目.100ug/mL牛血清蛋白标准液（mL）各管中血清蛋白显色浓度（ug/mL)1.0 mL / L 血清蛋白待测液（mL）0.15mol/L NaCl液（mL）考马斯亮蓝试剂（mL）—1.0—0.8—0.6—0.4—0.2—0.0空白0.001﹟0.202﹟0.403﹟0.604﹟0.805﹟1.00样1——1.01.0样2——1.01.0各加入4.0mL后，振荡均匀，于3分钟后开始测定，20分钟内完成。

2、人体血清蛋白测定

（1）人体血清蛋白待测液配制：用0.15mol/L NaCl将人体血清蛋白稀释1000倍； （2）人体血清蛋白待测液OD值测定：参见上述表格进行。

实验结果分析与数据处理：（注：当r≤0.9900时，需重点进行实验误差分析）

计算人体血清蛋白待测液的显色浓度，再由此显色浓度，计算人体血清蛋白含量（mg / mL）

实验报告要求 按定量分析实验报告书写格式书写，加样表和数据处理表以及标准曲线用电脑处理后打印后与

实验报告粘贴在一起。（注意打印报告单与实验报告的粘贴方式）。

思考题

1、请分析，总结考马斯亮蓝染色法测定蛋白含量的优缺点和操作注意事项？

2、请列表从实验原理、操作方法、标准品使用量、线性关系好坏比较微量凯氏定氮法、双缩脲法、Folin法、考马斯亮蓝染色法、紫外分光光度法测定蛋白质含量的优、缺点。