３ｌａ一；ｌｓ １６Ｓ～２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＰＣＲ和ＲＦＬＰ 分析对分枝杆菌复合菌群鉴定的研究 厶 张灵霞庄玉辉 ，———～’——— 一 谚、７／ 应用通用引物ａ及结核分枝杆菌特异的引物 【摘要】 目的对结核分枝杆菌复合菌群、鸟．胞内分枝杆菌复合菌群以及龟分枝杆菌龟亚种 及脓肿亚种等几种快速生长分枝杆菌进行鉴定。方法ｂ，对受试菌种的１６Ｓ ２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列进行ＰＣＲ扩增，并对引物ａ扩增产物进行限制性内切酶 Ｈ舵Ⅲ、ＭＳＰ Ｉ消化反应。结果应用引物ａ ＰａＲ扩增及ＲＦＬＰ分析能将除结核分枝杆菌复合菌群外的 受试的其它菌群中的各菌种区别开；而引物ｂ对受试各菌进行扩增，只有结核分枝杆菌有扩增条带出 现，可将结核分枝杆菌与结核分枝杆菌复合苗群的其它菌区别开，达到菌种鉴定目的。结论菌群加以区别。 应用 １６Ｓ～２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＰｃｌＲ和ＲＦＬＰ分析能将结核分枝杆菌复合菌群等几组常规方法难鉴定的 【主题词】分枝杆菌复合菌群；ＰＣＲ；ＲＦＬＰ ＿ －——－’ ● 一 寥譬 ｏｆ１ －瑚ｒＤ－ ｓｌａｄｙ ｏｆ ｄｊｍ ｍ ＮＡ￣ａｅｌｔｎｒ辩 啪ｒ凸 ［，Ｂｅ ｏｆ￣ｖｅｒａｌ哪瑚ｂａ 曲 妇， 础伽岫￣，ｒａｒ＃ｘ ｂｙＰｃＲ删ＲＥＬＰ舳 Ｙｕｔｍｉ．Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ１．ｕｍ Ｔｕｂｅｒａｄｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，３０９ １０∞９１，Ｐ Ｒ Ｏｒｉｎａ Ｄ 咖廊 ：ＺＨ４ＮＧ曲 妇，坞∞ Ｔｕｂｅｗｕ／ｏｓ／￣Ｒｅｓｅａｚｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，３０９ Ｈｏｓｐｔ￣ａ／，＆撕 ｌ０∞９１．Ｐ．Ｒ．Ｃｈ／ｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０Ｉ啦ｄｉ １＂ｏ ｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅ ｖａｌｎｅ ｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌｍｙｅｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ。０Ｉｌ１ｐ１ ｂｙ ａｍ－ ｐａｆｃ￣ｓ１６５－２３ｓ ｒＤＮＡ ｓｐａｃｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｃ￣ｍｐｌｅｘ，Ｍ．㈣ｌ删ｔ－脚 ｃｈｅＪ￣ｎａｅ ｍ ｈ如 ｅｎｚｙｍｅ ａｒａｌｙｓｉｓ ｏｆＰａＲ ｐｒ ｐ ａｎｄ ｓｅｖｅｒａｌ ｓｐｅｃｉｅｓｏｆｆ ａｔ ｇｅｎｅｌｅｖｅ１．Ｍ删 ｅｏｎｓｅａｖａｆｉｖｅ ｉｌｎ盯ａ ａｎｄ ｓｐｅｃｉａｌ ｉｍｅｒ ｂ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔＯ删椭１６Ｓ－２３Ｓ ｒＤＮＡ。ｐａｃｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｍ．ｍｋ ｎｇ唧∞ｂａ Ｉ皿ｓｕｃｈ ＢｓＭ． Ｔｈｅ ｒｅ￣ｌｌｔｓ ０ｆＰＣＲ ａｎｄ ｒｅｅｔｒｉｅｔｉｏｎ ｅｌｌｆ￣－ ．ｃｈｅｌｏｍｅ，Ｍ．ｃｈｄｏｎａｅ ｌｂ８ｐ．．ｑ￣ｅｅｅｎｌｅ ｅｔ ｅ１．Ｒｅｓｕｌ￣ｙｍｅ ｏｆＰＣＲ Ｉ：￣ｏｄｕｃｔｅ ｓｈｏｗｅｄ ｄａｔｔｈｉｓｍｌａ￣｝ｌｏｄｗａｓｄａｌｅｔＯ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓｔｅｓｔｅｄａｔ ｓｐｅｃｉｅｓｌｅｖｅｌ ｅｘｅｅｐｔ Ｍ． ￣ｘｒｃｕ／ｏｓ／ｓ ｃ０ｍｐｌｅｘ，ｕ８ｉｎｇ ｓｐｅｃｉａｌ ｉｆｒ－盯ｂ ｃ且ｎ ｄｉ丘目 恤ｅ脚．ｔｕｂｅｒｃｕ／ｏｓ／￣ｆｒｏｍ￣ｌａｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓｏｆｔｈｅ ｓａｍｅ Ⅱ＿ ｐｌｅｘ．ｏ咐ｄ璐ｉ肌ＰａＲ ａｎｄＲＦＬＰ日Ｉ】ａｌｖ８ｉ８ ｏｆ１６蟠Ｓ ｒＤＮＡ ｓｐａｃｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅａｒｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ鲫ｅｒｌｍｙｅｏｈａｃｔａｅ－ ｒＪ．ｕｍ ｏ０ｍｐｌ ｑｕｉｅｋＸｙ． 【ｓ 砸ｗ￣ｒｄｓ】Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｆｉｔｍａ ｐｋ；ＰＣＲ； 分枝杆菌有几组复合菌群，以细菌学反应方法 择碱基的差异性而设计，由赛百胜生物工程公司合 等表型特性往往难以鉴别开，且耗时长。我们应用 成和纯化。 １６Ｓ一２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＰＣＲ扩增和ＲＦＬＰ对结 仪器及试剂：扩增仪为ＰＥＴ￣．．型；电泳系统购白 核杆菌复合菌群、鸟．胞内分枝杆菌复合群及几种临 北京六一仪器厂；结核杆菌ＰＣＲ诊断试剂盒由本室 床致病的快速生长分枝杆菌进行了鉴定，结果报告 提供；限制性核酸内切酶为Ｐｗｍｅｇａ公司产品。 如下。 材料和方法 分枝杆菌菌种基因缉ＤＮＡ提取：按《分子克隆》 书介绍方法进行。 ＰｅＲ操作：参照本室设计的２５ 扩增体系并稍 作改进。引物ａ以９４℃变性１ ｒａｉｎ，４５℃退火３ｍｉｌｌ， 引物：ａ：５ ．ＧＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ－３ ；５＇－ＣＡＡＧＧＣ ７２℃延伸１ｍｉｎ，循环３０次后，再延伸７ｒａｉｎ。引物ｂ ＡＴＣＣＡＣＣＡＴ－３ 。根据文献报道设计，由生工生物工 以９４℃变性１ ｒａｉｎ，６５℃退火１ ｒａｉｎ．７２℃延伸１ ｒａｉｎ， 程公司台成。ｂ：５＇－ｃＧＧｃＡＧｃＧＴＡＴＣｃＡ 兀ＢＡ１０３ ； 循环３０次后再延伸７ ｍｉｎ。扩增产物经２％琼脂糖 ５＇－ＣＡＣＧＡＡＡＡＣＧＣＣＣＣＡＡＣＩＵ，－３ 。根据测序结果，选 凝胶电泳，紫外检测。 限制性内切酶消化反应：４０ 扩增产物用酚．氯 作者单位：１０００９１北京，解放军３０９医院结核病研究宣 通信作者：张灵霞，１０００９１ 菌种来源：如表１。 仿抽提后，沉淀物用ｌＯ １×ＴＥ溶解，取５ 在１ｏ￣反 维普资讯 http://www.cqvip.com
４期Ｃｈｉｎ ＪＭｉｅｍｂｌｏ［１ｍｍｍ￣Ｌ， ２０００，ｍ２０，Ｎ０ ４ 表１试验菌种及来源 Ｔａｌｋｉｅ１．Ｓｔｒａｈｌｓ删 岛０ＩＨ懈 应体系中加入３个单位的限制性核酸内切酶，３７℃ 度多态性均无法将结核杆菌复合菌群分开。但是根 反应２—３ ｈ，取消化产物进行琼脂糖凝胶电泳，紫外 据测序结果，选择碱基差异设计的引物ｂ对它们进 检测，判定结果。 行扩增，只有结核分枝杆菌Ｈ３７Ｒｖ扩增出１条 结 果 ２５ｏｂｖ的带（图２），牛分枝杆菌和ＢＣＧ均无扩增带出 现，可将它们鉴定开。对５８株结核分枝杆菌临床分 １．１６Ｓ一２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＰＣＲ扩增和 离株（３８株耐药株，２０株敏感株）受试结果与上述结 ＲＦＬＰ分析对结核杆菌复合群进行鉴定：用引物ａ 果一致。 对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、ＢＣＧ进行扩增。扩增 ２．鸟一胞内分枝杆菌复合菌群１６Ｓ一２３Ｓ ｒＤＮＡ 产物的琼脂糖凝胶电泳结果表明，３种菌扩增条带 间隔区序列ＰＣＲ扩增和ＲＦＬＰ分析：用引物ａ对鸟 数目和大小均完全相同，都只扩出ｌ条相对分子质 分枝杆菌、胞内分枝杆菌进行扩增。结果表明，鸟分 量（ ）在３４０ｂｐ左右的带（如图ｌａ）。它们扩增产 枝杆菌扩出２条带， 在４５０、３５ｏｂｐ左右，胞内分 物的限制性内切酶消化结果也完全相同（图１ｂ， 枝杆菌扩增出１条 在３５０ｂｐ左右的条带。扩增 １ｃ），都被ＨａｅⅢ切成２００、１０ｏ、５０ｂｐ左右的３条带， 产物经限制性核酸内切酶｝ｌａｅⅢ、Ｍｓｐ Ｉ酶切后琼脂 被ＭＳＰＩ切成 很近的２条带。１６Ｓ～２３Ｓ ｒＤＮＡ 糖凝胶电泳表明，鸟分枝杆菌被ＨａｅｌｌＩ切成２２０、 间隔区序列ＰＣＲ扩增及扩增产物的限制性片段长 ２００、１４０、１００、５０ｂｐ左右的５条带，被ＭｓｐＩ切成 ２ ３ ４ Ｉ ２ ３ ４ ５Ｉ７ ３９６ ３４４ ２９Ｅ 围１引物ａ对结榱杆菌复台菌群鉴定结果 啦！．Ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｃｍｌａ￣ｍ ０ｆ埘．觚 ∞唧Ｉ虹ｂｙ ｐｒｉｅｒ ａ ｌａ．Ｔｈｅ ｐｃＲ ｒｅｓｔｔｈｓ ０ｆ１６ｓ－２３ＳｍＮＡ ｎｐａｃ￣ｓｅｑｕｅｓｌｃｅ ｏｆＭ．ｍ 唧 ｂｖ ｐｒｉｍｅｒ ａ Ｉｂ Ｈ肿Ⅲｄｉ删ｒｅｓｕｌｔ ｏｆＰＥＲ ０ｄ岫０ｆ１６Ｓ－２３Ｓ ｒＤＮＡ ｎｐａｃ￣８ｅｑ１］ｌ￣ｔＯ８ ｏｆＭ．ｍ ｏⅢⅡ 慢 Ｉｃ．Ｔｈｅ Ｉ ｄｉｇｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔ ０ｆＰｃＲ ｐｌｏｄｌａＣｌｔ８ ０ｆ１６蚴Ｓ ｒＤ Ａ ｓｐａｃｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｍ．ｍ ｒａ血 ∞ ｌ№ ；２ Ｍ．柚阳ｄ ｍ７ ；３．Ｍ ；４．ＢｃＧ 维普资讯 http://www.cqvip.com
带，龟分枝杆菌脓肿亚种ＰＣＲ扩增产物不能被切 开，偶然分枝杆菌被切成２１０、１６０、ｌＯ０ｂｐ左右的３条 带。扩增产物的限制性内切酶Ｍｓｐ Ｉ酶切图谱表 明：偶然分枝杆菌被切成１９０、１５４、１００ｂｐ的３条带， 龟分枝杆菌龟亚种被切成４７０、１４０、１００、７０ｂｐ的４条 带，龟分枝杆菌脓肿亚种仍不能被切开。５０株龟分 枝杆菌脓肿亚种临床分离株结果与上述相同。由此 可见，应用ＰＣＲ扩增和ＲＦＬＰ对１６Ｓ一２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔 区序列进行分析能将这几种受试菌鉴定列种或亚种 的水平。 讨 ㈨２ Ｍ ｔｕｂｏｍｄｏｓ／ｓ Ｈ３７Ｒｖ；３．Ｍ ；４．ＢＣＧ 圄２引物ｂ对结核杆菌复台菌群鉴定结果 ｌｒｔｇ ２．＂ｈｉｅ ｄｉｍｍｍａｌａｉｆ￣时Ｍ． ＿加瑚蛐ｐｒｈｎｅｒｂ １ 。咐叫旺 论 结核菌群是引起人类结核病的主要原因，它们 ３４０、３１０、１０５、５０ｂｐ左右的４条带，而胞内分枝杆菌被 之间生物学特征、临床表现都很相似，临床上很难区 ＨａｅⅢ切成２０５、１４０ｂｐ左右的２条带，被ＭｓｐＩ切成 分。近年来，随着ＰＣＲ技术的飞速发展，已可快速有 ２４Ｏ、１０５ｂＤ左右的２条带。由上可见，无论是单纯的 效地检测临床标本中的分枝杆菌，但大多数检测结 １６Ｓ～２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＰＣＲ扩增产物琼脂糖凝 核分枝杆菌的引物只能将结核杆菌复合菌群与其它 胶电泳还是ＲＦＬＰ分析都能将鸟．胞内分枝杆菌复合 非结核分枝杆菌区别开来，而不能区分其所包含的 菌群区分开（图３ａ、ｂ、ｃ）。 各菌种，Ｐｏｒｔｉｌｌｏ等 报道的引物仅扩增结核分枝杆 ３．１６Ｓ ２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ｐｃＲ扩增和 菌，不扩增其它分枝杆菌ＤＮＡ。这是目前已知的结 ＲＦＬＰ分析对几种快速生长分枝杆菌的鉴定：用引物 核分枝杆菌最特异的片段，可有效地将结核分枝杆 ａ对偶然分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌 菌引起的疾病区分开。ｐａｔｅｌ口 设计的引物可区别牛 脓肿亚种的１６Ｓ一２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列进行ＰＣＲ扩 分枝杆菌和结核菌群的其它分枝杆菌。Ｄｅ Ｗｉｔ等 增。扩增产物琼脂糖凝胶电泳表明，偶然分枝杆菌 设计的引物可区别结核分枝杆菌和ＢＣＧ。我们通过 扩增出１条４７０ｂｐ左右的带，龟分枝杆菌龟亚种扩出 保守性引物ａ对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和ＢＣＧ ４７０，３５０６０的２条带，龟分枝杆菌脓肿亚种则能扩出 进行ＰＣＲ扩增以及扩增产物的限制性内切酶Ｈａｅ ３８０ｂｐ左右的１条带。仅靠ＰＣＲ扩增就能将这３种 Ｉｌｌ、Ｍｓｐ Ｉ消化反应。受试的３种菌这三项结果完全 快速生长的分枝杆菌鉴别开。扩增产物的限制性核 相同，不能区分。而根据我们测序结果设计的引物 酸内切酶ＨａｅⅢ酶切图谱表明：龟分枝杆菌龟亚种 ｂ，则只能扩出结核分枝杆菌，能将结核分枝杆菌复 ＰＣＲ扩增产物被切成３４０、２５０、１８０、１００、７５ｂｐ的５条 合菌群彼此区分开。 图３引物８对鸟二朐内分枝杆菌复合菌群鉴定结果 ｌｒｔｇ ３．１ｂｅ ｄｉｆｅｓ＇ｍａａｔｉｍ ０ｆＭ 讲 Ｍ． ｍ ∞呻ｂｙ 盯ａ ａ．１ｌｌｅ阢Ｒｌ￣ｍｌｔａ ０ｆ１６Ｓ－２３８ ｒＤＮＡ ｓｐａｃｅｒ ｏｅ ０ｆＭ．ａｆｆｔａｎ－Ｍ．ｂｔｕａｏｄ／ｔｄａｒｅ唧ｋ ｂｙ ｐｒｉｌ懈ａ ｂ ｌｔａｅⅢ 舢ｏｆ Ｒ ０ｄ ｏｆ１６Ｓ－２３Ｓ ｒＮＤＡ ｓｅｑｕｅａｃｅ ｏｆＭ ｌＩｆ／ｒａｒａｍ２ｈｄａｒｅ∞呷１ ｃ．１ｌｌｅＭｓｐｌ ｄｉｇｅｓｔ ｒｅａｕｌｔ ｏｆＰＣＲ ｐｌｏｄｕｅ１．０，ｏｆ１６Ｓ－２３Ｓ ｒＤＮＡ １．Ｍ日Ｊ ：２．Ｍ ；３ ｌＩｆ ｅ，ｔｒａｍ２ｈｄａｒｅ 盯￣ｔｔｌＬｅｌｌｃｌｅ ｏｆＭ ａｄａａｒｖＭ．／ｎｔｍｃａ￣ａｒｅ唧ｋ 维普资讯 http://www.cqvip.com
２０卷第４朝 ＩＭｉｅａ，ａｂｉ￣ｌｋ ． ２ＯＯＯ， ２０．№４ 对于人类而言，鸟一胞内分枝杆菌复合菌群的感 间隔区序列ＰＣＲ扩增及酶切分析，可快速有效地将 染并非经常发生。它们主要是以机会感染的方式多 它们区分开。 在儿童和免疫缺陷病人中发生。由于ＡＩＤＳ的流行， １６Ｓ一２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列由于具有普遍性及 鸟一胞内分枝杆菌复合菌群的感染也日趋引起人们 高变性，用于菌种鉴定具有优越性。我们的研究结 的重视。鸟一胞内分枝杆菌复合菌群包括鸟分枝杆 果表明，１６Ｓ～２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＰＣＲ扩增及扩增 菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌以及鸟分枝杆菌 产物酶切分析可以将分枝杆菌鉴定到种的水平。 Ｓｉｗｏｔｉｃｔａｎ，其中鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌表型上难 以区分。现在通过１６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析表明，一些原 来通过其表型鉴定为胞内分枝杆菌的（血清型４，６， 参考文献 Ｉ Ｐｏｒ＇６１Ｉ￣ＰＤ，Ｂｏａａ￣Ｂ，Ｍａ Ｉ－Ｉ．ｅｌ ａｌ ｃｉｉｆｅ ＤＮＡ Ｃ ｍ ｍ唧ｕ ｏｆ ８ｐｅｃｉ ｉｔｓ ｐ０龉ｉ ㈣ｉｎ 晖呻日ｌｓ Ｊ ８，１１）实际上是鸟分枝杆菌。Ｊｏｈａｎｎａ等“ 报道，应用 ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ探针可以将鸟分枝杆菌和菌群的 叫ｏｆ 缸 咄 Ｎｉｅｍｂ ，ｌ９９１ ２９：２１２６．２１２９ ２ ＰｍｄＩ｛Ｊ．ｔｔｅｒｍａ￣ＰＷ ｓｅｑＩ】锄ｃｅ衄ａ 日 肌ｄ吕口枷 曲 ｎ哪【珊ｏｆ日ｄ叨ｅｄ【 Ａ抽鲫州．Ｊ Ｃａｉｎ Ｍｉｃｍｂｉｏ１，ｌ９９ｏ，２８：５１３－５１６ ｐ山． ｆｏｒｉｄｅｎｔ击ｅａｌｉ￣０｜Ｗ 其它分枝杆菌区分开。Ａｎｄｒｅｓ等 报道，二者１６Ｓ ２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列相差２５个碱基，差异可以将二 者区分开。而我们１６Ｓ～２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列扩增 ３ Ｗｉ！Ｍ ，Ｓ 肌Ｐ， ∞Ｊ，ｄ Ａ ｉ哪 ｏｆ日 胛 ｃｈ血 ｒｅａｃ【 Ｉ ｆｏｒ世 ｄｄ０ｃｔｉ【蜘ｏｆ 厶ｐ础 出 ，ｔ 鲫Ｊｅ．Ｊ Ｃｕｎ ｃｒ０ｂ ， ｌ９９Ｊ．２９：９０６－９ｌＪ 及酶切结果相差很大，原因待查。 偶然分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌 脓肿亚种属快速生长分枝杆菌，它们多引起手术后 感染，慢性肉芽肿等疾病。培养和生化实验可以将 它们区分开，但工作量大，我们通过１６Ｓ～２３Ｓ ｒＤＮＡ ４．Ｍｕｌｒａ￣ＷＢ，Ｖ肌ｄ呻Ｇ，ＲｅｎｅＭ．ｅｔ ．ｃ０删 舶Ⅱｏｆｔｈｅ ２３ｓ ｂＤ啪． ＤＨＡ ｇｅｎｅｓｍｄｔｈｅ叩蝴０｜ｔｌｌｅ ｃｌｏｓｅｌｙ山 叩ｂｅｌｗ咖Ｍ． ｔｌｌｅ１６日 ２３ｓ删Ａ ・ ６ ∞ｏｆ口ｈ ０ 唧 ｃ ． Ａ ｇ雕ｅ ｍ￣ｅｒ－ 曲 ｅｄ ．ｍ 眦 Ｊ ｅｒｏＢｉｏｌ，１９９４，ｌ４０：１１（１３－ｌＩ嘴 ５ Ａ】 蜷Ｒ， 丑ｒ Ｆ，Ｍｄｍｍ Ｅ，Ｈ ａ１．Ｄ咀咖１ｙ ｒｅｌｉｅｄ如 ｙ ｗｉｎｇ 由ａｄｅｒ ｂ日 Ⅲｌ １６￣－２３ｓ删劬Ⅱ ｂ。ｄ印蛐 呷Ｊ帆Ｊ ０ Ｎｉｅｍｂｉｄ，１９９８，３６：１３９．１４ｓ （收稿日期 ｌ９９９—∞．１１） 幽门螺杆菌感染相关的消化性溃疡细胞免疫功能观察 子建文刘文彬周芬 例加～６１岁幽门螺杆菌（Ｈｐ）感 Ｈ￣－ｉｇ；测定及病理Ｇｉｅｍ，￣染色法阳性。 科大学免疫研究室提供。Ⅱ，６和１Ｌ－８测 染相关的消化性溃疡患者和３０例２１～ 对照组经胃镜检查无溃疡， 抗体阴性。 定采用双抗体夹心ＥＬｌＳＡ法，试剂盒由 ５４岁健康者的外周血Ｔ淋巴细胞亚群 外周血Ｔ淋巴细胞亚群测定采用 第四军医大学免疫教研室提供，均严格 结果表明，幽门螺杆菌感染相关的 和血清］１，－２、ｓＩＬ－２Ｒ、１Ｌ－６及］１，－８水平进 ＡＰＡＡＰ法，试剂盒由军事医学科学院生 按说明书进行操作。测定结果见表１。 行测定，探讨其细胞免疫功能。所有患 物制剂发展中心提供，血清Ｋ，－２，８Ⅱ，２Ｒ 者的诊断均经胃镜及括检病理检查证实 测定采用ＥＬＩ￣．法，试剂盒由白求恩医 消化性溃疡患者Ｃｌ？３ 、ＣＩＮ 和ＣＩＮ ／ 表１ Ｔ淋巴细胞亚群及Ⅱ，２、ｓｌＩ．－２Ｒ、Ⅱ，６、皿－８的测定结果 ＊：与对照组比较Ｐ＜０．０１ ｃＤ８ 比值及血清ＩＬ－２水平均显著降低， ￣ＩＬ－２ｔｌ水平显著增高有关。由于ｓⅡ，２Ｒ 幽门螺杆菌感染刺激血液中单核巨噬细 而ｓＩＬ－２Ｒ、１Ｌ－６和１Ｌ－８水平显著升高。 作为一种封闭因子具有与膜１Ｌ－２Ｒ竞争 胞、中性粒细胞和血管内皮细胞分秘Ⅱ， ＣＩＮ ，ｃＤ８ 比值和］１，－２活性下降主要 结合或直接与血循环中的Ｋ，－２结合的 ６和］１，－８，致使血中含量增高；而升高的 是由于ｃＤ４ 细胞数量减少功能低下所 能力，从而影响Ⅱ，２和膜１Ｌ－２Ｒ结合及 可进一步通过对中性粒细胞的趋化 致。］１，－２水平下降与本文检测的 ］１，－２水平下降，提示患者细胞免疫功能 作用，使组织细胞浸润，导致胃和十二指 低下且紊乱。ｓⅡ，２Ｒ水平明显增高，其 肠溃疡。检测外周血Ｔ淋巴细胞亚群、 作者单位：解放军第卉十医院检验科（子 机理可能是粘膜免疫系统受到激括，激 ］１，－２、ｓⅡ厂２Ｒ、１Ｌ－６和／１，－８对病情监测、疗 建文）；儿科（剂文彬、周芬） 括的’Ｂ细胞、巨噬细胞和 细胞表达 效观察及预后判定有一定价值。 通信作者：子建文，６７１００３大理，解放军 第六十医院检验科 ｓⅡ，２Ｒ的水平增加。Ⅱ，６和ＩＬ－８水平显 著高于对照组，可能是患者溃疡炎症和 （收稿日期：２０００— —０４）
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