泸州医学院学报 ２０１４年 第３７卷 第４期 ３４５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｖｏ１．３７ Ｎｏ．４ ２０１４ ｓｈＲＮＡ抑制Ｃ—ｅｒｂＢ一２基因表达对小鼠 Ｌｅｗｉｓ细胞凋亡的影响术 曹新梅，张岱权 ，夏纪毅 ，王栩 （泸州医学院：免疫学教研室； 附属医院中医科； 药物与功能性食品研究中心，四川泸ＪＪ１Ｉ、ｌ ６４６０００） 摘要目的：探讨ｓｈｔＬＮＡ抑制ｃ—ｅｒｂＢ一２基因表达对小鼠肺腺癌Ｌｅｗｉｓ细胞凋亡的影响。方法：构建４个ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／ Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２质粒和ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ。应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００转染ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ－ｓｈＮＣ至小鼠肺腺癌Ｌｅｉｓ细 ｗ胞，应用荧光显微镜观察荧光，确定最佳转染效率。应用ＲＴ—ＰＣＲ检测Ｃ—ｅｒｂＢ一２ ｍＲＮＡ的水平，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测该 蛋白的表达，筛选干扰效果最好的质粒。应用流式细胞术检测空白组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ组和最佳干扰组细胞的凋亡率。 结果：ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ（￣ｇ）：Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（ 为０．４：１时，转染效果最好。４个ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ－ｅｒｂＢ－２质粒均能降低 Ｃ—ｅｒｂＢ一２ ｍＲ２ｑＡ水平和蛋白的表达，其中干扰效果最好的是ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｉｌｓ一３６６９。用于后续实验。ｐＧＰＵ６／ ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ一３６６９质粒组的凋亡率高于空白组和ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ组（Ｐ＜０．０５）。结论：ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ— ｅｒｂＢ～２一ｍｉｌｓ一３６６９质粒能抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ细胞Ｃ－ｅｒｂＢ一２基因的表达，诱导细胞凋亡。 关键词Ｃ—ｅｒｂＢ一２；ｓｈＲＮＡ；Ｌｅｗｉｓ细胞：凋亡 中图分类号Ｒ７３４．２ 文献标识码Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１０００—２６６９．２０１４．０４．００１ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃ－ｅｒｂＢ－２ ｇｅｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ｓｈＲＮＡ ｏｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ Ｌｅｗｉｓ ｃｅｌｌｓ Ｃａｏ Ｘｉｎｍｅｉ，Ｚｈａｎｇ Ｄａｉｑｕａｎ ，Ｘｉａ Ｊｉｙｉ２，Ｗａｎｇ Ｘｕ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ；１Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ＴＣＭ，ｔｈｅ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＬｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ；２Ｒｅｓｅａｃｈ Ｃｅｒｉｔｅｒ ｏｆ Ｄｒｕｇ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄ，Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃ－ｅｒｂＢ－２ ｇｅｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ｓｈＲＮＡ ｏｎ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ Ｌｅｗｉｓ ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：４ ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ，Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２ ｐｌａｓｍｉｄ ａｎｄ ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ ｗｅｒｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ． ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄ ｉｎｔｏ ｍｏｕｓｅ Ｌｅｗｉｓ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆ— ｅｒｅｎｃｃ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｃ—ｅｒｂＢ一２ ｓｈＲＮＡ．Ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ＦＣＭ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｗｈｅｎ ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／ Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ（ ：Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（ １）ｗａｓ ０．４：１．ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ－ｅｒｂＢ一２－－ｍｕｓ一３６６９ ｈａｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｅｆｆｅｃｔ，ａｎｄ ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｉｎｄｕｃｅ ｈｉｇｈｅｒ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｒａｔｅ ｏｆ Ｌｅｗｉｓ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ－ｓｈＮＣ ｇｒｏｕｐ ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ－ｅｒｂＢ－２－ｍｕｓ－３６６９ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃ—ｅｒｂＢ一２ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｅｗｉＬｓ ｃｅｌｌｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｃ—ｅｒｂＢ一２；ｓｈＲＮＡ；Ｌｅｗｉｓ ｃｅｌｌｓ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 目前，肺癌是所有恶性肿瘤中发病率和病死率 最高的肿瘤。全世界每年至少有１６０万的新发病例 和１３０万的死亡病例。其中，肺腺癌的发病率上升尤 为明显，占非小细胞肺癌ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ， 四川省卫生厅基金（１００２３６） ＮＳＣＬＣ）的４０％Ｉ２） 。大多数患者一经诊断即已处于 晚期，失去了手术指针。放化疗由于其严重的副作 用，常使患者无法耐受。肺癌的生物治疗日趋成为研 究的热点。 作者简介：曹新梅（１９７９一），女，讲师，硕士，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｘｍ＿７９１０１１＠１６３．ｃｏｍ ３４６ 人表皮生长因子受体一２（Ｃ—ｅｒｂＢ一２）基因，即 ＨＥＲ２基因，是表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ＥＧＦＲ）家族的一员。其编码产物是一 种具有酪氨酸蛋白激酶活性的膜受体，无可溶性的 配体。但能与ＥＧＦＲ家族的其它成员形成异二聚体 而被激活。研究表明，ＮＳＣＬＣ存在Ｃ—ｅｒｂＢ一２基因的 过表达【ｕ，尤其是肺腺癌，Ｃ—ｅｒｂＢ一２基因的过表达与 其不良预后有关『２棚。本研究通过构建Ｃ—ｅｒｂＢ一２基 因的短发卡ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ．ｓｈＲＮＡ）质粒载 体，转染小鼠肺腺癌Ｌｅｗｉｓ细胞株，探讨沉默Ｃ— ｅｒｂＢ一２基因能否诱导癌细胞的凋亡。 １材料与方法 １．１材料 小鼠肺腺癌Ｌｅｗｉｓ细胞株（由泸州医学院免疫学 实验室提供）。高糖ＤＭＥＭ（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）、胎 牛血清（Ｈｙｃｌｏｎ公司）。ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２、 ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ ｆ上海吉玛公司构建），Ｌｉｐｏｆｅｃ． ｔａｍｉｎｅ ２０００（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）。焦炭酸二乙酯 （ＤＥＰＣ）（美国Ｓｉｇｍａ公司）、Ｔｒｉｚｏｌ（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公 司）、ＲＴ—ＰＣＲ试剂盒（日本ＴＯＹＯＢＯ公司），Ｃ—ｅｒｂＢ一 ２和ＧＡＰＤＨ的上、下游引物（上海生工）。Ｃ—ｅｒｂＢ一２ 鼠单克隆抗体ａｂｃａｍ公司），羊抗鼠二抗（碧云天）。 １＿２方法 １＿２．１小鼠肺腺癌Ｌｅｗｉｓ细胞株的培养 ｅＬｗｉｓ细胞株常规培养于含１０％胎牛血清和青 链霉素的高糖ＤＭＥＭ培养基中，于３７ｏＣ、５％ＣＯ２培 养传代。 １－２．２ Ｌｅｗｉｓ细胞株的转染及转染效率的优化 将Ｌｅｗｉｓ细胞株接种于２４孔板，细胞长满７０％ 时进行转染。取无血清ＤＭＥＭ培养基至３个ＥＰ管， １２５ 管，加入质粒４ 管，混匀。另取无血清 ＤＭＥＭ培养基至３个ＥＰ管，１２５ １／管，分别加入 Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００ ８ ｌ、１ ｌ、１２ ｌ，混匀，静置５ ｍｉｎ。 将含有质粒的试剂加入到对应的脂质体混合液中， 混匀。静置２０ ｍｉｎ后，加入到经无血清培养基洗涤 的Ｌｅｗｉｓ细胞株表面。于３７℃、５％ＣＯ２培养６ ｈ，弃 去转染液，更换含血清培养基培养。转染细胞于 ３７℃、５％ＣＯ２培养４８ ｈ后，荧光显微镜下观察绿色 荧光．检测转染效率。转染效率高的ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／ Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ（￣ｇ）：脂质体（ 比例用于后续实验。 １．２．３筛选干扰效果最佳的ｓｈＲＮＡ １＿２．３．１应用ＲＴ—ＰＣＲ检测Ｌｅｗｉｓ细胞株Ｃ—ｅｒｂＢ一２ ｍＲＮＡ的水平 泸州医学院学报 ２０１４年 第３７卷 第４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｖｏ１．３７ Ｎｏ．４ ２０１４ 消化Ｌｅｗｉｓ细胞，接种于６孔板。实验分组：空 白组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ— ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ一３４７组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ一 １９４４组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍＵＳ一２３１０组、 ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｕ￥一３６６９组 以Ｌｉｐｏｆｅｃ— ｔａｍｉｎｅ ２０００为转染试剂，按最佳的转染质粒：脂质体 比例进行转染。转染细胞３７℃、５％ＣＯ：培养４８ ｈ 后。用Ｔｒｉｚｏｌ试剂抽提每组细胞的总ＲＮＡ，使用分光 光度仪定量。逆转录后进行ＰＣＲ。Ｃ—ｅｒｂＢ一２上游引 物：５’一ＧＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＧＡＣＡＡＴＡＴ一３’，下游引物： ５’－ＴＧＡＴＣＴＣＣＴＣＣＡＧＧ Ｃ一３’，扩增片段１５７ ｂｐ； ＧＡＰＤＨ上游引物：５’一ＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＧＴ－ ＧＡＡＣＧ一３’。下游引物：５’一ＣＴＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡ— ＧＡＧＴＧＧＴＧ一３’，扩增片段２３３ ｂｐ。反应条件：９４℃ 预变性２ ｍｉｎ；９４ｃｃ变性３０ Ｓ，５５ｃＣ退火３０ ｓ，７２ｃｃ延 伸１ ｍｉｎ，３２个循环；７２￣Ｃ延伸５ ｍｉｎ。扩增结束后进 行琼脂糖凝胶电泳。 １．２．３．２应用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｌｅｗｉｓ细胞株Ｃ— ｅｒｂＢ一２蛋白的表达 将Ｌｅｗｉｓ细胞悬液接种于６孔板。实验分组：空 白组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ— ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ－３４７组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ一 １９４４组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ一２３１０组、 ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ一３６６９组。细胞转染 ７２ ｈ后，用ＰＢＳ洗细胞３次，用细胞裂解液裂解各 组细胞提取总蛋白，测定蛋白含量。制胶（８％分离 胶，５％浓缩胶），上样，进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳，６０ Ｖ， ３０ ｍｉｎ；１２０ Ｖ，２ ｈ。转膜，４００ ｍＡ，８０ ｍｉｎ。ｌｘＰＢＳＴ， 洗膜１０ ｍｉｎ。加５％的脱脂牛奶封闭液封闭１ ｈ。ｌｘ ＰＢＳＴ，洗膜１０ ｍｉｎ。加入Ｃ—ｅｒｂＢ一２单抗，４℃，过夜。 Ｉ￣ＰＢＳＴ，洗膜３次，１０ ｍｉｎ／次。￣Ｊｎ－－抗，室温孵育１ ｈ， Ｉ￣ＰＢＳＴ，洗膜３次，１０ ｍｉｎ／次，显色，拍照。 １．２．４流式细胞术检测Ｌｅｗｉｓ细胞的凋亡 将Ｌｅｗｉｓ细胞悬液接种于６孔板。实验分组：空 白组、ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ组、干扰效果最好的 ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２质粒组。转染４８ ｈ后，消化 细胞．制成单细胞悬液，洗涤２次。每管加入ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ５００ ｌ，重悬细胞。每管加入Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ— ＦＩＴＣ ５ ｌ混匀后，加入ＰＩ ５ １，混匀，室温避光，反 应５ ｍｉｎ。用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡。 １．３统计学处理 采用ＳＰＳＳ １６．０统计软件分析，计量资料以 ±ｓ 表示，数据经方差齐性检验后，进行方差分析，Ｐ＜０．０５ 表示差异有统计学意义。 泸州医学院学报 ２０１４年 第３７卷 第４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｖｏｌ－３７ Ｎｏ．４ ２０１４ ’ 一 ２ ： ｒ￣ －－Ｉ 芷 ０ 黎 ．－ ・’ ＿ 宴 ．舞 ≥ ・ ． Ｆｒｎｃ Ａ：空白组 Ｂ：ｐＧＰＵ６／Ｒ．ＦＰ／Ｎｅｏ—ｓｈＮＣ组 Ｃ：ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｍｕｓ一３６６９组 图４流式细胞术检测Ｌｅｗｉｓ细胞的凋亡率 ３讨论 随着对肺癌的发生、发展的细胞和分子机制的 深入研究，晚期肺癌患者的标准化治疗，正从基于患 者临床病理的经验性治疗向生物标志驱动性的个体 化治疗转变。Ｃ—ｅｒｂＢ一２基因位于人染色体１７ｑ２１，编 码Ｐｌ８５．是一种具有酪氨酸激酶活性的膜表面受 体。Ｃ—ｅｒｂＢ一２基因参与正常细胞的信号转导。该受 体的活化可以激活多条信号转导途径．如磷脂酰肌 醇一３激酶（ｐｈ０ｓｐｈａＩｉｄｙｌｉｎ０ｓｉｔ０ｌ ３－ｋｉｎａｓｅ，ＰＩ３Ｋ）、丝 裂原活化蛋白激酶ｆｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓ． ｅｓ，ＭＡＰＫｓ）ａｎｄ ＪＡＫ（ｊｕｓｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｋｉｎａｓｅ）／信号转导 子和转录激活子（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ＳＴＡＴ）等 。Ｃ—ｅｒｂＢ一２蛋白的过表达与 肿瘤的发生、发展、侵袭转移及预后等有关，使其成 为肿瘤靶向和基因治疗的理想靶点。有文献报道， ２０％ＮＳＣＬＣ患者存在Ｃ—ｅｒｂＢ一２蛋白过度表达ｆ ５ｌ，且 腺癌的阳性率最高．Ｃ—ｅｒｂＢ一２蛋白过表达的ＮＳＣＬＣ 患者预后差，５年生存率低Ｉ 。ｌ。 ＲＮＡ干扰是应用特异的小干扰ＲＮＡ ｆｓｍａｌｌ ｉｎ— ｔｅｆｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ，ｓｉＲＮＡ）有效抑制内源性基因的表达。 南于ＲＮＡ十扰具有高效、特异、快速、毒副作用小等 优点，且能在转录后显著抑制基因的表达，是研究基 闵功能的重要Ｔ具，并逐步成为对肿瘤、病毒性疾病 等进行基 治疗研究的一种手段。有文献报道，ＲＮＡ 干扰能抑制Ｃ—ｅｒｂＢ２过表达的乳腺癌、结肠癌细胞 的增殖，诱导其凋 ，抑制细胞的侵袭和趋化能力ｌ¨Ｉ 申萍等ｌｓｌ应用ＲＮＡ干扰抑制人肺腺癌Ａ５４９细胞Ｃ— ｅｒｂＢ一２基因表达．从而抑制细胞的生长。Ｒｅｎ ＸＬ等 研究发现．Ｃ—ｅｒｂＢ一２基因在肺腺癌和大细胞肺癌细 胞株中过表达：通过ｓｉＲＮＡ，肺腺癌人ＳＰＣ—Ａ—ｌ细 胞株中的Ｃ—ｅｒｂＢ一２被持续抑制，导致癌细胞增殖及 克隆形成率降低，细胞周期阻滞于Ｇ 期，以及在裸 鼠体内形成肿瘤的能力减弱。本实验构建了４个针 对小鼠Ｃ—ｅｒｂＢ～２基因的ｓｈＲＮＡ重组表达质粒．均 能抑制该基因在小鼠肺腺癌Ｌｅｗｉｓ细胞中的表达， 其中ｐＧＰＵ６／ＲＦＰ／Ｎｅｏ—ｅｒｂＢ一２一ｎｔｉｓ一３６６９的干扰效 果最好，能明显诱导Ｌｅｗｉｓ细胞凋亡，初步提示利用 ｓｈＲＮＡ抑制Ｃ—ｅｒｂＢ一２基因的表达进行基因治疗有 望成为一种新的治疗肺腺癌的有效手段。 参考文献 ２ ３ ４ ５ ７ 作者投稿系统ｈｔｔｐ：／／ｘｂ．１ｚｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ／
