４７４空堡壁璧堂窒查！！！！芏！旦笙！！鲞蔓！塑垦！ｉ！！垒！！！堕型！！！皇世！！！！！！！！！：！！！堕！：！・疼痛诊疗与研究・鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经痛大鼠背根神经节ＧＩＲＫｌ表达的影响李莉６４６０００黄焕森汪灵芝连肖强阮林泸州市，西南医科大学附属医院麻醉科（李莉）；５１０２６０广州医科大学附属第二医院麻醉科（黄焕森、汪灵芝、连肖强、阮林）通信作者：黄焕森，Ｅｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｈｓ５４８０＠１６３．ｃｏｎＤ０１：１０．３７６０１ｅｍａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４—１４１６．２０１６．０４．０２４【摘要】目的评价鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经痛大鼠背根神经节Ｇ蛋白偶联内向整ＳＰＦ级健康成年雄性ＳＤ大鼠１４４只，８～１０周龄，体重流钾通道１（ＧＩＲＫｌ）表达的影响。方法２００～２２０ｇ，采用随机数字表法分为４组（ｎ＝３６）：正常对照组（Ｃ组）、右美托咪定组（Ｄ组）、糖尿病神经痛组（ＤＮＰ组）和糖尿病神经痛＋右美托咪定组（ＤＤ组）。采用腹腔注射链脲佐菌素６０ｍｇ／ｋｇ的方法制备大鼠糖尿病神经痛模型。Ｄ组和ＤＤ组于注射枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液或链脲佐菌素后１４ｄ时鞘内注射右美托眯定１．５Ｉｘｇ／ｋｇ，Ｃ组鞘内注射等容量生理盐水。于注射链脲佐菌素前（Ｔ。）、注射链脲佐菌素后１４ｄ（Ｔ，）、鞘内注射后２、４和６ｈ（Ｔ：～。）时测定机械痛阈，于Ｔ：．。时测定痛阈后处死大鼠取脊髓背根神经节，采用免疫荧光法检测ＧＩＲＫｌ阳性细胞数目，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＧＩＲＫｌ的表达。结果与ＤＮＰ组比较，ＤＤ组Ｔ，一。时机械痛阈升高，脊髓背根神经节ＧＩＲＫｌ阳性细胞计数增加，ＧＩＲＫｌ表达上调（Ｊｐ＜０．０５）；与Ｄ组比较，ＤＤ组Ｔ：．。时脊髓背根神经节ＧＩＲＫｌ阳性细胞计数增加，ＧＩＲＫｌ表达上调（Ｐ＜Ｏ．０５）；与ｃ组比较，ＤＮＰ组Ｔ．～。时机械痛阈降低（Ｐ＜０．０５）。结论美托咪定通过上调背根神经节ＧＩＲＫｌ表达减轻大鼠糖尿病神经痛。鞘内注射右【关键词】右美托咪啶；糖尿病；神经痛；神经节，脊；Ｇ蛋白偶联内向整流钾通道基金项目：国家自然科学基金（８１４０１０１７）；广州市卫生局西医引导项目（２０１４１Ａ０１１０８３）ＥｆｆｅｃｔａｂｅｔｉｃｏｆｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅＬｉＬｉ，ＨｕａｎｇｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＩＲＫｌｉｎｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉａｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｄｉ－ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｐａｉｎＨｕａｎｓｅｎ，ＷａｎｇＬｉｎｇｚｈｉ，ＬｉａｎＸｉａｏｑｉａｎｇ，ＲｕａｎＬｉｎＳｏｕｔｈｗｅｓｔＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇ），ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏ印ｉｔａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｕｚｈｏｕ６４６０００，Ｃｈｉｎａ（Ｌｉ￡）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏ印ｉｔａｌｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇ‘５１０２６０．Ｃｈｉｎａ（ＨｕａｎｇＨＳ，ＷａｎｇＬＺ，ＬｉａｎＸＱ，ＲｕａｎＬ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＨｕａｎｇＨｕａｎｓｅｎ，Ｅｍａｉｌ：＾“ｏｎｇ＾ｓ５４８Ｄ＠，６３．ｃｏｒｎ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅｒｏｏｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｈｅｎ—Ｇ—ｐｒｏｔｅｉｎ—ｃｏｕｐｌｅｄｉｎｗａｒｄｌｙｒｏｐａｔｈｉｃｒｅｃｔｉｆｙｉｎｇＫ＋ｃｈａｎｎｅｌＡｔｏｔａｌｏｆ１４４１（ＧＩＲＫ１）ｉｎｄｏｒｓａｌｇａｎｇｌｉａｏｆｒａｔｓｐａｉｎ（ＤＮＰ）．ＭｅｔｈｏｄｓｈｅａｌｔｈｙａｄｕｌｔｍａｌｅＳＰＦＳｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓ，ａｇｅｄ８—１０２ｗｅｅｋｓ．ｗｅｉｇｈｉｎｇ２００—２２０ｇ，ｗｅｒｅｔａｂｌｅ：ｃｏｎｔｒｏｌｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ（ｎ３６ｅａｃｈ）ｕｓｉｎｇａｒａｎｄｏｍｎｕｍｂｅｒｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐＣ），ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐＤ），ｇｒｏｕｐＤＮＰ，ａｎｄｍｏｄｅｌｗａｓＤＮＰ＋ｄｅｘｍｅ。ｏｆｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏ—ａｔｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐＤＤ）．ＤＮＰｍｇ／ｋｇ．ＩｎＤａｎｄｏｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｓｉｎｇｌｅｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ１．５Ｉｍｇ／ｋｇｏｆｗａｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｔｉｎ（ＳＴＺ）６０ｄａｙｓＤＤｇｒｏｕｐｓ，ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗａｓｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙｇｉｖｅｎｉｎ１４ａｆｔｅｒｃｉｔｒａｔｅｂｕｆｆｅｒｐａｉｎＳＴＺｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅｗａｓｔｈｅｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅｇｒｏｕｐＣ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｃａｌｔｈｒｅｓｈｏｌｄｍｅａｓｕｒｅｄｂｅｆｏｒｅＳＴＺｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（Ｔｏ），ａｔ１４ｄａｙｓａｆｔｅｒＳＴＺｉｎｊｅｃｔｉｏｎｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｃａｌｐａｉｎ（Ｔ】），ａｎｄｔｈｒｅｓｈｏｌｄａｔａｔ２，４ａｎｄ６ｈａｆｔｅｒｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｒａｔｓｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（Ｔ２．４）．ＡｆｔｅｒｒｏｏｔＴⅥ，ｔｈｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ，ａｎｄｔｈｅｄｏｒｓａｌｇａｎｇｌｉａｏｆｔｈｅｌｕｍｂａｒｓｅｇｍｅｎｔ（Ｌ４．６）ｗｅｒｅｒｅｍｏｖｅｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＧＩＲＫｌｐｏｓｉｔｉｖｅｎｏｆｌｕｏｒｅｓｅｅｎｅｅａｎｄｔｈｒｅｓｈｏｌｄｗａｓｃｅｌｌｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＩＲＫｌｐｒｏｔｅｉｎｂｙｉｍｍｕ—ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｇｒｏｕｐＤＮＰ，ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｃａｌｒｏｏｔＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓｐａｉｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＧＩＲＫ１ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓｉｎｄｏｒｓａｌｇａｎｇｌｉａｗａｓｓｉｇｎｉｆｉ—万方数据主坐壁醛堂盘查！！！！至！旦箜！！鲞箜！塑ｃａｎｔｌｙ垦！！！！垒！塑尘型！！！垒￡！！！垫！！！！！！：！！！堕！：！ＤＤ（Ｐ＜４７５ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈｇｒｏｕｐＤ，ｔｈｅｏｆｏｆＧＩＲＫ１ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｄｏｒｓａｌａｔａｔＴ２．４ｉｎｇｒｏｕｐｗａｓ０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｕｍｂｅｒｏｆＧＩＲＫＩｐｏｓｉｔｉｖｅｗａｓｃｅｌｌｓｉｎｒｏｏｔｇａｎｇｌｉａｇｒｏｕｐａｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｒｏｕｐＣ，ｔｈｅＧＩＲＫｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｔｈｒｅｓｈｏｌｄｗａｓＴ２．４ｉｎＤＤ（Ｐ＜０．０５）．ｉｎｇｒｏｕｐＤＮＰｍｅｃｈａｎｉｃａｌｐａｉｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄＤＮＰＴｌ－４（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆＧＩＲＫｌｉｎｄｏｒｓａｌｒｏｏｔＩｎｔｒａｔｈｅｃａｌｇａｎｇｌｉａｏｆｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅａｔｔｅｎｕａｔｅｓｔｈｒｏｕｇｈｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ；Ｄｉａｂｅｔｅｓｃｏｕｐｌｅｄｉｎｗａｒｄｌｙ—ｒｅｃｔｉｆｙｉｎｇＦｕｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｓｍｅｌｌｉｔｕｓ；Ｎｅｕｒａｌｇｉａ；Ｇａｎｇｌｉａ，ｓｐｉｎａｌ；ＧＰｒｏｔｅｉｎ—ｐｒｏｇｒａｍ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（８１４０１０１７）；ＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅＧｕｉｄｅＰｒｏｊｅｃｔｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｕｎｉｃｉｐａｌＨｅａｌｔｈＢｕｒｅａｕ（２０１４１Ａ０１１０８３）右美托咪定具有镇静、镇痛作用、‘。。研究表明，鞘内注射右美托咪定可有效减轻糖尿病神经痛’２。。有必要明确其机制。糖尿病神经痛是一种常见的神经病理性疼痛，可引起自发痛、痛觉过敏甚至痛觉超敏等异常疼痛。Ｇ蛋白偶联内向整流钾通道１（ＧＩＲＫｌ）参与了抗大鼠糖尿病神经痛的过程旧４１。人和大鼠ＧＩＲＫｌ有９７％的氨基酸序列是相同的∞。。本研究拟评价鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经痛大鼠背根神经节ＧＩＲＫｌ表达的影响。材料与方法动物选择及分组ＳＰＦ级健康成年雄性ＳＤ大鼠１４４只，８～１０周龄，体重２００～２２０ｇ，由广东省实验动物中心提供。采用随机数字表法分为４组（ｎ＝３６）：正常对照组（Ｃ组）、右美托咪定组（Ｄ组）、糖尿病神经痛组（ＤＮＰ组）和糖尿病神经痛＋右美托咪定组（ＤＤ组）。采用腹腔注射链脲佐菌素６０ｍｇ／ｋｇ的方法制备大鼠糖尿病神经痛模型。Ｄ组和ＤＤ组于注射枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液或链脲佐菌素后１４ｄ时，参照文献［６］的方法，在背部备皮，常规消毒，以第４和５腰椎间隙为穿刺点，用３０Ｇ针头从间隙正中穿刺，观察有甩尾或抬足反应后，鞘内注射右美托咪定（批号：Ｈ２０１３００９３，江苏恒瑞医药股份有限公司）１．５Ｉ．Ｌｇ／ｋｇ，Ｃ组鞘内注射等容量生理盐水。糖尿病神经痛模型的建立大鼠２或３只单笼饲养，室温２０～２５℃，保证其正常昼夜节律，避免强光和噪音的刺激，自由进食和饮水。适应坏境３ｄ。造模前２ｄ，测定双侧后足基础机械痛阈，禁食１２ｈ，于造模当天测定大鼠体重、空腹血糖。空腹血糖正常（３～５ｍｍｏｌ／Ｌ）的大鼠，单次腹腔注射链脲佐菌素（Ｓｉｇｍａ公司，美国）６０ｍｇ／ｋｇ（将链脲佐菌素溶于ｐＨ值为４．２，浓度为０．１ｍｍｏｌ／Ｌ的枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液中配成２％链脲佐菌素溶液）。注射后１４ｄ时，尾静脉采血测空腹血糖，血糖≥１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ，且万方数据双侧后足机械痛阈＜４ｇ的大鼠为糖尿病神经痛模型制备成功。机械痛阈的测定采用ｖｏｎＦｅｒｙ细丝触觉测痛仪（Ｓｔｏｅｈｉｎｇ公司，美国）测定，参照文献［５］中介绍的方法计算机械痛阈。测试完最小或最大力度均不出现阳性反应，则记为０．２５或１５．００ｇ。当大鼠机械痛阈＜４ｇ为出现痛觉超敏反应。采用下列公式计算：机械痛阈＝１０Ｘｆ＋ｋｃｒ，其中ｘ为最末次应用的ｙｏｎＦｒｅｙ细丝刺激力度的ｌｏｇ值，１３＂为相邻ＶＯｆｌＦｒｅｙ探针力度ｌｏｇ值之间差值的平均值（即０．２２４），ｋ为阳性和阴性反应类型的查表值。按上述方法测定注射链脲佐菌素前（Ｔ。）、注射链脲佐菌素后１４ｄ、鞘内注射后２、４和６ｈ（Ｔ。）时的机械痛阈。免疫荧光实验于Ｔ…时测定机械痛阈后每组随机取６只大鼠，腹腔注射１０％水合氯醛３．５ｍｌ／ｋｇ麻醉后取第４至第６腰神经节段的背根神经节，４％多聚甲醛固定２４ｈ，先后移入２０％、３０％蔗糖４℃梯度脱水至组织沉底，适当修剪用ＯＣＴ包埋后，以Ｌｅｉｃａ冰冻切片机切片，厚１５“ｍ，将切片贴于玻片上，４％多聚甲醛固定３０ｍｉｎ，ＰＢＳ漂洗，滴加含０．７５％ｔｒｉｔｏｎ的ＰＢＳ溶液于组织切片上，室温反应ｌｈ，ＰＢＳ漂洗，滴加１０％胎牛血清封闭液，室温ｌｈ，弃去余液不洗，滴加多克隆兔抗大鼠ＧＩＲＫｌ抗体（１：１００，ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司，美国）于组织切片上，置于湿盒内４ｏＣ过夜，ＰＢＳ漂洗，每张切片滴加ＴＲＩＴＣ标记的驴抗兔二抗（１：１００，ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ公司，美国），避光室温下湿盒中孵育２ｈ，在二抗孵育时间结束前１０ｍｉｎ滴加适量２０ＩＬＬｇ／ｍｌＤＡＰＩ复染，ＰＢＳ漂洗，抗荧光衰减封片剂封片，荧光显微镜（ｘ４００，Ｌｅｉｃａ公司，德国）下观察并拍摄图像，计数ＧＩＲＫｌ阳性细胞。背根神经节ＧＩＲＫｌ表达的检测于Ｔ，．。时测定机械痛阈后每组随机取６只大鼠，腹腔注射１０％水合氯醛３．５ｍｌ／ｋｇ麻醉后，快速分离第４至第６腰４７６生堡窒醛堂蓥查垫！！生！旦箜！！鲞箜！塑鱼！垫！垒！型！型！！！垒Ｐ！ｉ！！！！！！∑！！．堑！堕！：！神经节段背根神经节，用预冷４℃的０．１ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ溶液冲洗血污，提取样本蛋白，测定蛋白浓度，进行电泳及转膜实验，在５％脱脂牛奶的ＴＢＳＴ液中室温摇床上封闭２ｈ，ＴＢＳＴ冲洗，将ＰＶＤＦ膜放人玻璃皿中，浸入含有兔抗大鼠ＧＩＲＫｌ多克隆抗体（１：２００，ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司，美国）和抗内参蛋白（ＧＡＰ．ＤＨ）鼠单克隆抗体（１：３０００，ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司，美国）的ＴＢＳＴ溶液中，４℃孵育过夜，在ＴＢＳＴ液冲洗，将ＰＶＤＦ膜放人玻璃皿中，加入含有ＨＲＰ标记的羊抗兔ＩｇＧ抗体（１：３０００，北京康为世纪生物科技有限公司）和羊抗鼠ＩｇＧ抗体（１：３０００，北京康为世纪生物科技有限公司）的ＴＢＳＴ溶液中，室温摇床上孵育ｌｈ，ＴＢＳＴ冲洗，将两种显色底物１：１等体积混合，将混合物覆盖在膜表面，１～２ｍｉｎ，摇晃使均匀。用保鲜膜把膜包起来，暗室中将ｘ光片覆盖在膜的面上，曝光，显影，定影。利用ｇｅｌ—ｐｒｏ图像分析软件对染色条带进行分析。以目的蛋白灰度值与ＧＡＰＤＨ灰度值的比值反映ＧＩＲＫｌ的表达。统计学处理采用ＳＰＳＳ２０．０软件包进行分析，正态分布的计量资料以均数±标准差（ｉ±ｓ）表示，组间比较采用单因素方差分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果与ＤＮＰ组比较，ＤＤ组Ｔ，～。时机械痛阈升高，脊髓背根神经节ＧＩＲＫｌ阳性细胞计数增加，ＧＩＲＫｌ表达上调（Ｐ＜０．０５）；与Ｄ组比较，ＤＤ组Ｔ：～。时脊髓背根神经节ＧＩＲＫｌ阳性细胞计数增加，ＧＩＲＫｌ表达上调（Ｐ＜０．０５）；与ｃ组比较，ＤＮＰ组Ｔ…时机械痛阈降低（Ｐ＜０．０５）。见表１－３。表１四组大鼠各时点机械痛阈的比较（ｇ，ｎ＝６，ｉ±ｓ）Ｄ口Ｈ６８＋一７●５＋一０８２±２９３●±３２ｌ８＋一４９Ｄ２ｄＨｎ６７±９２±Ｏ８＋一０８ｌ９＋一Ｏ９１９±０９Ｄ６７±７６●８±１７３●Ｏ９●＋一２９０３＋一３ｌ９２土１９Ｃ畦胛组组６９±８６９±１８７Ｏ±●８７０±ｌ８６７±１６注：与ＤＮＰ组比较，８Ｐ＜０．０５与Ｃ组比较，“Ｐ＜０．０５表２四组大鼠脊髓背根神经节ＧＩＲＫｌ阳性细胞计数的比较（个，ｎ＝６，Ｅ±ｓ）注：与ＤＮＰ组比较，４Ｐ＜０．０５与Ｄ组比较，“Ｐ＜０．０５万方数据表３四组大鼠脊髓背根神经节ＧＩＲＫｌ表达的比较（ｎ＝６，Ｅ±ｓ）注：与ＤＮＰ组比较，３Ｐ＜Ｏ０５与Ｄ组比较，“Ｐ＜０．０５讨论参照文献［５，７］，本研究采用腹腔注射链脲佐菌素６０ｍｇ／ｋｇ的方法制备大鼠糖尿病神经痛模型，注射后１４ｄ时尾静脉采血测空腹血糖，血糖≥１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ，且双侧后足机械痛阈＜４ｇ为大鼠糖尿病神经痛模型制备成功。参照文献［８］，本实验选择鞘内注射右美托咪定的剂量为１．５ｐ．ｇ／ｋｇ。右美托咪定的终末清除半衰期约为２ｈ，但其镇痛效应长达２４ｈ一１，因此本实验选取鞘内注射右美托咪定后２、４和６ｈ时测定各指标。本研究结果表明，与ＤＮＰ组比较，ＤＤ组Ｔ…时大鼠机械痛阈升高，提示鞘内注射右美托咪定减轻了大鼠糖尿病神经痛。背根神经节神经元内有多种Ｇ蛋白偶联受体，其中包括ｅｔ，肾上腺素能受体。背根神经节中存在着ＧＩＲＫｌ～４个亚单位的表达，ＧＩＲＫ通道是处于Ｇ蛋白偶联受体下游的离子通道。１…。静息状态下，ＧＩＲＫ通道可与Ｇ蛋白偶联受体形成ＧＰＣＲ—Ｇａｌ３１一ＧＩＲＫ复合物¨“。当激动剂与Ｇ蛋白结合后，Ｇ仅亚基释放ＧＤＰ，与ＧＴＰ结合，此时，ｐ１亚基与Ｇｅｔ亚基解聚，解离的Ｇ１３－／亚基随后直接激活ＧＩＲＫ通道，被激活后的ＧＩＲＫ通道神经元细胞钾离子外流导致神经元细胞膜超极化，进而降低神经系统的兴奋性。本研究结果显示，鞘内注射右美托咪定后糖尿病神经痛大鼠背根神经节ＧＩＲＫＩ的表达相对于对照组明显上调。当外周神经受损时，背根神经节神经元肾上腺素能受体表达上调【”１。推测右美托咪定减轻大鼠糖尿病神经痛的机制可能是：大鼠糖尿病神经痛时，背根神经节上ｄ，肾上腺素能受体数量相对于对照组增多，鞘内注射右美托咪定后，仪：肾上腺素能受体被激活的数量增加，致使活化的Ｇ蛋白解离出的Ｇｐ＾ｙ增多，因而Ｇｐ．ｙ激活更多的ＧＩＲＫｌ通道，引起通道开放，产生超极化反应，降低神经元的兴奋性，从而减轻大鼠糖尿病神经痛。综上所述，右美托咪定通过上调背根神经节ＧＩＲＫｌ表达减轻大鼠糖尿病神经痛。史堡壁醛堂銎查！！！！笙！旦箜！！鲞箜！塑曼！！！！垒！塑尘型！！！垒哑！！！！！！！！！：！！！型！．！４７７参考文献ＧｕＸＹ，ＬｉｕＢＬ，ＺａｎｇＫＫ，ｅｔａ１．ＤｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅｉｎｈｉｂｉｔｓＴｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔＮａｙ１．８ｓｏｄｉｕｍｃｈａｎｎｅｌａｃｔｉｖｉｔｙｔｈｒｏｕｇｈＧｉ／ｏ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙｉｎｒａｔｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎｎｅｕｒｏｎｓ［ＪＪ．Ｍｏ—ｌｅｃｕｌａｒＢｒａｉｎ．２０１５，８：１５．ＤＯＩ：１０．１１８６／ｓ１３０４ｌ－０１５－０１０５－２．［２］ＣａｌｃｕｔｔＮＡ，ＣｈａｐｌａｎＳＲ．Ｓｐｉｎａｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆｔａｃｔｉｌｅａｌｌｏ—ｄｙｎｉａｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ［Ｊ］．ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ，１９９７，１２２：１４７８－１４８２．［３］ＣｈｅｎＳＲ，ＣｈｅｎＨ，ＹｕａｎＷＸ，ｅｌａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｐｒｅｓｙｎａｐｔｉｃａｎｄｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ“２一ａｄｒｅｎｏｃｃｐｔｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｅｓｐｉｎａｌｄｏｒｓａｌｈｏｒｎｉｎｐａｉｎｆｕｌｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍａｅｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，２０１１，３３７（１）：２８５—２９２．ＤＯＩ：１０．１１２４／ｊｐｅｔ．１１０．１７６５８６．［４］ＣｈｅｎｇＨＪ．ＭａＫＴ，ＬｉＬ．ｅｔａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｔ－ｐｈａ・ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓｕｂｔｙｐｅｓｉｎｒａｔｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎａｆｔｅｒｃｈｒｏｎｉｃｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＪＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ［ＭｅｄＳｃｉ］，２０１４，３４（３）：３２２—３２９．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１１５９６－０１４－１２７７—１．［５］ＳｐａｕｓｃｈｕｓＡ，ＬｅｎｔｅｓＫＵ，ＷｉｓｃｈｍｅｙｅｒＥ，ｅｌａ１．ＡＧ—ｐｒｏｔｅｉｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎｗａｒｄｌｙｒｅｃｔｉｆｙｉｎｇＫ＋ｃｈａｎｎｅｌ（ＧＩＲＫ４）ｆｒｏｍｈｕｍａｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓａｓｓｏｃｉａｔｅｓｗｉｔｈｏｔｈｅｒＧＩＲＫｃｈａｎｎｅｌｓ［Ｊ］ＪＮｅｕｒｏｓ－ｃｉ，１９９６，１６（３）：９３０—９３８．［６］ＭｅｓｔｒｅＣ，ＰｅｌｉｓｓｉｅｒＴ，ＦｉａｌｉｐＪ，ｅｔａ１．Ａｍｅｔｈｏｄｔｏｐｅｒｆｏｒｍｄｉ—ｒｅｃｔｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｉｎｉｅｃｔｉｏｎｉｎｒａｔｓＪ．ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌＭｅｔｈｏｄｓ，１９９４，３２（４）：１９７—２００．ＤＯＩ：１０．１０１６／１０５６－８７１９（９４）９００８７－６．［７］刘京珍，叶英．不同剂量链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型稳定性观察［Ｊ］．徐州医学院学报，２０１３．３３（５）：３０５－３０７．ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２０６５．２０１３０５，００８．ＬｉｕＪＺ，ＹｅＹ．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｏｆｓｔｒｅｐ－ｔｏｚｏｔｏｃｉｎｉｎｍｏｄｅｌｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ『Ｊ］ＡｅｔａＡｃａｄｅｍｉａｅＭｅｄｉｃｉｎａｅＸｕｚｈｏｕ，２０１３，３３（５）：３０５—３０７．ＤＯＩ：１０．９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００・２０６５．万方数据２Ｕｌｊ．０５．００８．［８］李雄娟，黄焕森，陈海铭，等．右美托咪定鞘内注射对大鼠急性疼痛行为及脊髓ＧＩＲＫ２表达的影响［Ｊ］．广东医学，２０１３，３４（１２）：１８１６．１８１８．ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９４４８．２０１３．１２．００７．ＬｉＸＪ，ＨｕａｎｇＨＳ，ＣｈｅｎＨＭ，ｅｔａ１．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅｏｎｔｈｅａｃｕｔｅｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅａｃｔｉｏｎａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｐｉｎａｌＧＩＲＫ２ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，２０１３，３４（１２）：１８１６－１８１８．Ｄ０１：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—９４４８．２０１３．１２．００７［９］ＺｈａｎｇＨ，ＺｈｏｕＦ，ＬｉＣ，ｅｌａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｕｎｄｅｒｌｙ－ｉｎｇｔｈｅａｎａｌｇｅｓｉｃｐｒｏｐｅｒｔｙｏｆｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅａｎｄｉｔｓｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎ：ａｎｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１３，８（２）：ｅ５５５５５６．ＤＯＩ：１０．１３７１，ｊｏｕｒ－ｈａｌ．ｐｏｎｅ．００５５５５６［１０］ＧａｏＸＦ，ＺｈａｎｇＨＬ，ＹｏｕＺＤ，ｅｔａ１．Ｇｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄｉｎｗａｒｄ—ｌｙｒｅｃｔｉｆｙｉｎｇｐｏｔａｓｓｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｓｉｎｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎｎｅｕｒｏｎｓ［Ｊ］．ＡｅｔａＰｈａｒｍａｃｏｌＳｉｎ，２００７，２８（２）：１８５－１９０．ＤＯＩ：１０，１１１１／ｊ．１７４５・７２５４２００７．００４７８．ｘ．ＮａｋａｔｓｕｋａＴ，ＦｕｊｉｔａＴ，ｌｎｏｕｅＫ，ｅｔａ１．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＧＩＲＫｃｈａｎｎｅｌｓｉｎｓｕｂｓｔａｎｔｉａｇｅｌａｔｉｎｏｓａｎｅｕｒｏｎｅｓｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｒａｔｓｐｉｎａｌｃｏｒｄ：８ｐｏｓｓｉｂｌｅｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ［Ｊ］．ＪＰｈｙｓｉｏｌ，２００８，５８６（Ｐｔ１０）：２５１１－２５２２．ＤＯＩ：１０．１１１３／ｊｐｈｙｓｉ０１．２００７．１４６０７６．［１２］ＴａｎｉｍｏｔｏＫ，Ｔａｋｅｂａｙａｓｈｉｆｒ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＴ，ｅｔａ１．Ｄｏｅｓｎｏｒｅｐｉ－ｎｅｐｈｒｉｎｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｐａｉｎｂｅｈａｖｉｏｒｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉ—ａ？：ａｐｉｌｏｔｓｔｕｄ），［Ｊ］．ＣｌｉｎＯｆｌｈｏｐＲｅｌａｔＲｅｓ，２０１１，４６９（９）：２５６８．２５７６．ＤＯｌ：１０．１００７／ｓ１１９９９—０１１．１７９８．ｘ．（收稿日期：２０１５—１２－３１）（本文编辑：葛胜辉）
