１３８ 实用医学杂志２００９年第２５卷第１期 ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ， ａｎｄ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ［Ｊ］． Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２００５，１７１（４）：３８８—４１６． ２ Ｉ Ｔｏｒｒｅｓ Ａ．Ｔｈｅ ｎｅｗ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ／Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｎａｇ￣ ｍｅｎｔ ｏｆ ｈｏｓｐｉｔａ１．ａｃｑｕｉｒｅｄ． ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ．ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｄ ｈｅａｈｈｃａｒｅ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ： ａ￣ｃｕｒｒｅｎｔ ｖｉｅｗ ａｎｄ ｎｅｗ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ 综上所述．老年重症肺炎存在较高的病死率，尤 以老年ＨＣＡＰ为甚。其致病病原具有以Ｇ～杆菌为 主、ＥＳＢＬｓ检出率较高的特点，其中，老年ＨＣＡＰ患 者之铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌比例和混合感 染率增加尤其显著，对常用抗生素有较高的耐药率。 显示了老年重症ＣＡＰ与ＨＣＡＰ的病原及其分布具 有其特殊性，在抗感染时可选用敏感性较高的亚胺 培南和含酶抑制剂抗生素、头孢他啶、阿米卡星、拉 氧头孢等抗生素。 ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ Ｏｐｉｎ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ，２００６，１２（５）：４４４－４４５． １ ３ １ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ 『Ｓ］．ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．ＰＡ：ＮＣＣＬＳ，１９９９：３６． ８ｔｈ ［４］ 李家泰，李耘，王进．中国医院和社区获得性感染革兰阴性杆菌 ４参考文献 耐药监测研究［Ｊ］．中华医学杂志，２００３，８３（５）：３６５． ［１］ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｉｎｆｅｎｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ． （收稿：２００８—０４—０７编辑：杜冠辉） Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｄｕｌｔｓ ｗｉｔｈ ｈｏｓｐｉｔａｌ ａｃｑｕｉｒｅｄ， Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｉ２０００免疫分析仪测定血清肿瘤标志物 甲胎蛋白、ＣＡ １ ２５的初步评价 孙琦谢服役郑美娜 摘要 目的：对Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｉ２０００免疫分析仪定量检测肿瘤标志物的方法学予以初步评价。方法：根据美国临 床实验室标准化委员会颁布的《定量临床检验方法的初步评价：批准指南（ＥＰ１０一Ａ）》提供的方法，按照特定顺序连 续５ ｄ测定低、申、高浓度人混合血清中的甲胎蛋白（ＡＦＰ）、ＣＡ１２５浓度。计算偏差、总不精密度及其截距、斜率、非 线性、携带污染和漂移，并进行ｔ检验。结果：３种浓度ＡＦＰ的绝对偏差为低值一０．２９ ｔｘｇ／Ｌ、中值一６．３３ ｇ／Ｌ、高 值一８．６３ Ｉｘｇ／Ｌ，均低于允许偏差的±２．１０９ Ｉ．ｚｇ／Ｌ、±３１．０３２ ｔ．￣ｇ／Ｌ、±６３．７２ Ｉｘｇ／Ｌ。３种浓度ＣＡ１２５的绝对偏差为低 值一０．７９ ＩＵ／ｍＬ、中值一４．７３ ＩＵ／ｍＩ 、高值一４．１７ ＩＵ／ｍＬ，均低于允许偏差的±３．３８１ ＩＵ／ｍＬ、±３４．４９４ ＩＵ／ｍＬ、４－３９．３１５ ＩＵ／ｍＬ。３种浓度ＡＦＰ总不精密度批内变异系数（ＣＶ）分别为３．７５５％、２．６２２％、２．６１７％，均小于厂家说明书规定的 １０％。中、高两种浓度ＣＡ１２５总不精密度ＣＶ分别为５．６９３％、３．４８２％，均小于全国Ｉ】名床检验操作规程规定的允许不 精密度６．８％，低浓度ＣＡ１２５的总不精密度ｃ 为８．５２５％，大于允许不精密度。ＡＦＰ漂移（ｔ＝１．０５，Ｐ＞０．０５）和携带 污染（ｆ＝０．８６，Ｐ＞０．０５），ＣＡ１２５漂移（￡＝１．２３，Ｐ＞０．０５）和携带污染（￡：３．６３，Ｐ＞０．０５）对精密度的影响差异均无 显著性。结论：Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｉ２０００免疫分析仪测定血清ＡＦＰ、ＣＡ１２５准确度和精密度良好，性能指标基本符合临床应用 要求。 关键词免疫测定： 甲胎蛋白类； ＣＡ１２５ 肿瘤标志物的检测是肿瘤早期诊断的一个重 敏感性，是以测量吖啶酯（ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）标记物在 要辅助手段，甲胎蛋白（ＡＦＰ）是原发性肝癌的特异 碱性介质中发生化学反应所产生的光子量为基础。 性标志物。ＣＡ１２５为卵巢癌首选的肿瘤标志物。临 具有灵敏度高、操作简便、标记物稳定、无放射性污 床上定量测定ＡＦＰ、ＣＡ１２５常采用放射免疫分析 染等优点．在检测中应用越来越广泛。本研究参照 （ＲＩＡ）和酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）。ＲＩＡ法有较高 美国临床实验室标准化委员会（ＮＣＣＬＳ）ＥＰ１０．Ａ文 的灵敏度和准确性．但存在放射性环境污染。标记 件…的要求．对ＣＭＩＡ方法测定血清中ＡＦＰ、ＣＡ１２５ 物半衰期短、批间差异大等缺陷。ＥＬＩＳＡ法简便， 含量的方法学进行评价，现报告如下。 但定量欠精确，线性范围窄，存在钩状效应等不 １材料与方法 足。近年来发展起来的化学发光微粒子免疫分析技 １．１ 仪器与试剂 美国ＡＢＢＯＴＹ公司Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ 术（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ， ｉ２０００全自动化学发光免疫分析仪及与之配套的 ＣＭＩＡ），既有免疫反应的特异性，又有化学发光的高 ＡＦＰ、ＣＡ１２５检测试剂和校准品，质控物为伯乐公司 产品（中值：批号４０１９２；低值：批号２６０１５）。 １．２标本来源本院患者血清，经ＡＸＳＹＭ检测系 作者单位：３１５０４１ 浙江省宁波市医疗中心李惠利医院检验科 统（该系统已校准、定标，且质控在控）检测后，收集 （孙琦，谢服役）；３５２０００温州医学院检验医学院（郑美娜） 混合成高、中、低３个浓度血清，经ＡＸＳＹＭ测定数 用医学杂志２００９年第２５卷第１ １３９ 值作为靶值。ＡＦＰ的高、中、低浓度靶值分别为 ８２０．３８、４００．８９和１９．０１￣ｚｇ／Ｌ；ＣＡ１２５的高、中、低浓 度靶值分别为３８０．５４、２０６．６９和ｌ４．０１ ＩＵ／ｍＬ。 １．３ 方法 （１）全部靶值血清均分装后保存于 ３０℃，各浓度每天取１管，测定前充分复融。常规操 作，执行定标、测定质控，质控结果在控。（２）根据 一２．２ 目测线性 以靶值为ｘ轴，以测定值为Ｙ轴， 设ｘ＝Ｙ画参考线，高、中、低３个指定值应在此线 ３ ２。 相应位点。另将高、中、低３个浓度１５个测定值的３ 个均值用点标于图上，画出测定线（图３、４），与参考 线比较，可对线性、偏差作出目测初评。结果显示，线 性良好、偏差很小，接近重叠。 ９ＯＯ 一Ｏ Ｏ ０ Ｏ ０ Ｏ ● ＮＣＣＬＳ ＥＰＩＯ．Ａ文件．每天按中一高一低一中一中一 低一低一高一高一中的顺序测定各浓度试样（第１ 个中值作为测定起始用，不作统计）。每天测定一 批，连续测定５ ｄ。每批测定为连续测试，在测定过 ≤８００ ７００ 兰６００ 靶值 测定值 程中，后９个数据中的任何一个不及格，都须弃掉该 批全部数据，重新测定。 １．４结果的判断标准 １．４．１绝对偏差的接受范围参照美国ＣＬＩＡ ８８质 量水平设计控制方案规定，ＡＦＰ、ＣＡ１２５的可接受范 围为靶值±３ｓ １．４．２ 总不精密度的接受标准 鉴于对ＡＦＰ目前 尚无明确规定．故以厂家的说明书指定要求作为标 准。最大允许不精密度是１０％。参照全国临床检验 操作规程【 ］的规定，ＣＡ１２５允许不精密度是６．８％。 １．５统计学处理利用实验室专业评价软件１．８２ 版（ＥＰ Ｖａｌｉｄａｔｏｒ ｖｅｒ １．８２）的ＥＰＩＯ．Ａ系列进行统计 分析，计算截距、斜率、非线性、携带污染、漂移，并 进行ｔ检验。 ２ 结果 ２．１ 目测离群点 见图１、２。以靶值浓度为ｘ 轴，以测定值与参考浓度的偏差为Ｙ轴，将每天 的测定值均标于图上，可观察有无离群点，并对精 密度作出目测初评。结果显示，无离群点、精密度 良好。 ｊ｛】｛ｌ ｏｏ ４ｉ『ｏ ｏｏ 。ｏ０ ｏｏｏ 堪 靶值浓度（ ｇ，Ｌ） 图１ ＡＦＰ离群点观察 ｛ｊ】】ｊ 堡 １ＯＯ ４０１Ｏ ６００ ４００ ｌ豁 ｔ 靶值浓度（ｕｇ／Ｌ） 图２ ＣＡ１２５离群点观察 震５ １００ Ｏ 图３ ＡＦＰ线性图 —・一靶倩 测定值 （１ｕｖｆ１Ｉ一 波嚣 图４ ＣＡ１２５线性图 ２．３ ＡＦＰ、ＣＡ１２５偏差分析 以各浓度５ ｄ的测定 结果均值与其对应靶值计算偏差，以±３ｓ作为可接 受标准，判断其测定结果是否可以接受。从表１可见 ＡＦＰ和ＣＡ１２５ ３个浓度水平的绝对偏差均小于其允 许偏差值。 表１ ＡＦＰ、ＣＡ１２５偏差分析结果 ＡＦＰ（ ｇ／Ｌ） ＣＡ１２５（ＩＵ／ｍＬ） 项目 低值 中值 高值 低值 中值 高值 ２．４ ＡＦＰ、ＣＡ１２５不精密度分析结果按照ＥＰ１０．Ａ 提供的方法计算总不精密度批内变异系数（ＣＶ）。 ＡＦＰ以厂家说明书规定的允许不精密度１０％作为标 准。ＣＡ１２５参照全国临床检验操作规程的规定，允许 不精密度是６．８％。从表２可见ＡＦＰ高、中、低３种 浓度混合血清的总不精密度ＣＶ分别为２．６１７％、 ２．６２２％、３．７５５％，均小于厂家说明书规定的１０％。 ＣＡ１２５高、中、低３种浓度总不精密度ＣＶ分别为 ３．４８２％、５．６９３％和８．５２５％。只有低值ＣＡ１２５的不精 密度稍大于允许误差范围。 ４ ３ ３ ２ ２ ｌ １ ∞∞∞蚰∞ ∞ ０ 实用医学杂志２００９年第２５卷第１期 表２ ＡＦＰ、ＣＡ１２５不精密度分析结果 量。 临床实验室引入任何一种新仪器或新方法都 应进行全面的评价（如重复性、携带污染率、线性以 及结果的可比性等）。ＮＣＣＬＳ制订了一套评价方案 能正确客观地对上述性能作出评价。ＮＣＣＬＳ文件 ＥＰ１０．Ａ评价方案能够帮助实验室对实验方法或分 析仪器进行线性、偏差、精密度方面进行初步的评 价。与传统评价方法相比，ＥＰＩＯ．Ａ文件不仅需要的 数据少而且更为简便，利用特定的顺序测试样本， 使不同浓度的样本互相交错。更接近临床患者标本 ２．５ ＡＦＰ、ＣＡ１２５多元回归分析对５ ｄ所有数据 计算截距、斜率、携带污染、非线性和漂移，作￡检 验。从表３和表４可见：ＡＦＰ和ＣＡ１２５漂移和携带 污染的回归参数的Ｐ值均＞０．０５，表明两者对精密 度的差异影响无显著性。ＡＦＰ截距差异存在显著性 （Ｐ＜０．０１），表明截距不为零；ＡＦＰ非线性差异也同 样存在显著性（Ｐ＜０．０１），说明标本浓度对线性范围 有影响。ＣＡ１２５斜率差异存在显著性（Ｐ＜Ｏ．０１），表 明斜率不为零。 表３ ＡＦＰ所有批汇总 注： 使用参数估计值作为ｔ检验的数据，表４同 表４ ＣＡ１２５所有批汇总 截距 斜率 携带污染 非线性 漂移 壑堕 ：！ ：！ ： ： 竺 二 ： ！！ ｔ值 ２．０６ —７．２４ ３．６３ —２．４６ １．２３ Ｐ值 ＞Ｏ．０５ ＜０．０１ ＞０．０５ ＞Ｏ．０５ ＞Ｏ．０５ ３讨论 Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｉ２０００免疫分析系统是基于ＣＭＩＡ技 术的全自动免疫分析系统。它采用了ＣＭＩＡ技术 对抗原、抗体进行定量检测。在测定ＡＦＰ、ＣＡ１２５ 的过程中。待测样本中的ＡＦＰ、ＣＡ１２５首先与包被 了抗ＡＦＰ、ＣＡ１２５的微粒子结合，然后与标记有吖 啶酯的二抗形成三明治样夹心复合物。吖啶酯在 碱性介质中发生化学发光反应，反应强度以相对 光单位（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｌｉｇｈｔ ｕｎｉｔｓ，ＲＬＵ）来表示。通过测 定ＲＬＵ的读数，可对样本中的ＡＦＰ、ＣＡ１２５定 情况，使得评价结果更真实。而且还能完成传统评 价方法不具备的非线性度和漂移度检验。采用 检 验对数据进行统计学处理后，使结果更加科学和客 观。 在本次测试中ＡＦＰ、ＣＡ１２５测定的不准确度用 偏差表示，ＡＦＰ和ＣＡ１２５ ３种浓度的绝对偏差均低 于允许偏差，故偏差初评的结果是可接受的。ＡＦＰ 和ＣＡ１２５的总不精密度用变异系数表示，包括批内 和日间两种不精密度。ＡＦＰ高、中、低３种浓度混合 血清的总不精密度均小于厂家说明书规定；ＣＡ１２５ 高值和中值混合血清的总不精密度均小于允许不 精密度６．８％。低值血清的ＣＶ为８．５２５％，稍大于允 许误差范围。但从本次评价来看，低值均低于临床 判定阳性结果的参考下线，重复性稍差。并不影响 临床诊断，说明其总不精密度初步评价符合要求。 通过对回归方程５个参数（截距、斜率、携带污染、 非线性、漂移）作ｔ检验，可见漂移和携带污染对精 密度的影响差异无显著性。ＡＦＰ和ＣＡ１２５截距差异 存在显著性（Ｐ＜０．０１），表明截距不为零；ＡＦＰ非线 性差异也同样存在显著性（Ｐ＜０．Ｏ１），提示我们在 实际检测ＡＦＰ标本过程中要注意标本浓度对线性 范围的影响，适当时可对其进行稀释再进行检测。 本研究结果充分显示，Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｉ２０００免疫分析 仪测定ＡＦＰ、ＣＡ１２５的准确度和精密度良好，未见携 带污染、漂移等因素有明显影响，性能指标可靠，适 合临床实验室使用。 ４参考文献 ［１］ ＮＣＣＬＳ． Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ． Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍｅｔｈｏｄｓ Ｋｓ］．ｗａｙｎｅ ＰＡ：ＥＰ１０－Ａ．１９９８． １２］ 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［Ｍ］＋３版．南 京：东南大学出版社，２００６：７８． （收稿：２００８—０７—１４编辑：袁宁）