龙柏枝叶水浸提液及其萃取物除草活性的生物测定

植物资源与环境学报２０１０，１９（１）：５０—５５　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　龙柏枝叶水浸提液及其萃取物除草活性的生物测定　罗　兰，袁忠林，郝明亮，邹　雪　（青岛农业大学农学与植物保护学院，山东青岛２６６１０９）　摘要：采用培养皿滤纸法，以油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．）、反枝苋（Ａｒｎａｒａｎｔｈｕｓ　ｒｅｔｒｏｌｆｅｘｕｓ　Ｌ．）、生菜（Ｌａｃｔｕｃａ　ｓａｔｉｖａ　Ｌ．　ｖａＹ．ｒａｍｏｓａ　Ｈｏｒｔ．）、番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　Ｍｉｌｌｅｒ）和小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　Ｌ．）为供试植物，对龙柏（Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉ￣‘Ｋａｉｚｕｃａ’）枝叶水浸提液的除草活性进行了生物测定，并以番茄为测定对象，对水浸提液的不同溶剂萃取　物的除草活性也进行了生物测定；另外，采用薄层层析法对乙酸乙酯萃取物的除草活性成分进行了初步定性分析。　结果显示，在０．０５～０．２　ｇ・ｍＬ　质量浓度范围内，龙柏枝叶水浸提液对５种植物的种子萌发及幼苗根长和茎高均　有一定的抑制作用，且随质量浓度的提高，抑制作用逐渐增强，其中０．２　ｇ・ｍＬ　水浸提液对５种植物的种子萌发　及幼苗根长和茎高的抑制率均在８０．００％以上，对番茄种子萌发及幼苗根长和茎高的抑制率最高，均达到　１００．００％。在龙柏枝叶水浸提液的石油醚、乙酸乙酯和水萃取物中，０．０１、０．０２和０．０４　ｇ・ｍＬ　石油醚或乙酸乙酯　萃取物以及０．０２和０．０４　ｇ・ｍＬ　水萃取物对番茄种子萌发及幼苗根长和茎高均有一定的抑制作用，且随质量浓　度的降低，抑制率逐渐降低；其中，乙酸乙酯萃取物的抑制作用最强，水萃取物的抑制作用最低。薄层层析显色结　果表明，龙柏枝叶水浸提液乙酸乙酯萃取物的主要除草活性成分为酚类成分。　关键词：龙柏枝叶；水浸提液；萃取物；除草活性；生物测定；酚类　中图分类号：ｓ４８２．４；￥７９１．０８　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７４—７８９５（２０１０）０１—００５０—０６　Ｂｉｏａｓｓａｙ　ｏｆ　ｈｅｒｂｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　‘Ｋａｉｚｕｃａ’ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ＬＵＯ　Ｌａｎ，ＹＵＡＮ　Ｚｈｏｎｇ一／ｉｎ，ＨＡＯ　Ｍｉｎｇ—ｌｉａｎｇ，ＺＯＵ　Ｘｕｅ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｏｎｏｍｙ　ａｎｄ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｑｉｎｇｄａｏ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６１０９，Ｃｈｉｎａ），　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓｏｕｒ．＆Ｅｎｖｉｒｏｎ．２０１０，１９（１）：５０－５５　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．，Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ　ｒｅｔｒｏｌｆｅｘｕｓ　Ｌ．。Ｌａｃｔｕｃａ　ｓａｔｉｖａ　Ｌ．ｖａｒ．ｒａｍｏｓａ　Ｈｏｒｔ．．　Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　Ｍｉｌｌｅｒ　ａｎｄ　Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　Ｌ．ａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｐｌａｎｔｓ，ｂｉｏａｓｓａｙ　ｏｆ　ｈｅｒｂｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｒ　ｏｆ　Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓ￣‘Ｋａｉｚｕｃａ’ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｄｉｓｈ．ｆｉｌｔｅｒ　Ｐ印ｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｎ　ｕｓｉｎｇ　Ｌ．　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　ａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｐｌａｎｔ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ．ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗａｓ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ　ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｌｙ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＴＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０５—０．２　ｇ・ｍＬ～．ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｈａｓ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｏ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｒｏｏｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｓｔｅｍ　ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｐｌａｎｔｓ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｇｒａｄｕａｌｌｙ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　０．２　ｇ・ｍＬ一　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｏ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｒｏｏｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｓｔｅｍ　ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｐｌａｎｔｓ　ａｒｅ　ａｌｌ　ａｂｏｖｅ　８０．００％．ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｔｏ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　１００．０Ｏ％．Ｉｎ　ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ．ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｒ　ｏｆ　Ｓ．ｃｈｉｎｅｎｓ￣‘Ｋａｉｚｕｃａ’，０．０１．０．０２　ａｎｄ　０．０４　ｇ・ｍＬ　ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ　ｏｒ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ．ａｎｄ　０．０２　ａｎｄ　０．０４　ｇ・ｍＬ　ｗａｔｅｒ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｌｌ　ｈａｖｅ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｏ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｒｏｏｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｓｔｅｍ　ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｒｅｄｕｃｅ　ｇｒａｄｕａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｉｎ　ｗｈｉｃｈ．ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ．ｔｈａｔ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｏｒ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ＴＬＣ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｓ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　收稿日期：２００９—０８—０９　基金项目：青岛农业大学人才基金项目（６３０５１９）　作者简介：罗兰（１９６５一），女，陕西咸阳人，博士，教授，主要从事植物源农药的研究工作。　第１期　罗　兰等：龙柏枝叶水浸提液及其萃取物除草活性的生物测定　５ｌ　‘Ｋａｉｚｕｃａ’，ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｈｅｒｂｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ａｔｅ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ‘Ｋａｉｚｕｃａ’；ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ；ｐａａｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ；ｈｅｒｂｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ；ｂｉｏａｓｓａｙ；ｐｈｅｎｏｌｓ　龙柏（Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ‘Ｋａｉｚｕｃａ’）为柏科　（Ｃｕｐｒｅｓｓａｃｅａｅ）圆柏属（Ｓａｂｉｎａ　Ｍｉｌ１．）植物圆柏（桧）　［Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ａｎｔ．］的变种，是重要的园林绿　化树种之一，种植较为广泛，其根和枝叶均可提取柏　木脑及柏木油，枝和叶还可以入药，具有祛风散寒、活　血利尿的功效，是具有重要经济价值的植物资　源ｌ】一　。龙柏的挥发油具有抗肿瘤活性，能抑制肺癌　细胞的生长　，并对金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ）和表皮葡萄球菌［Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（Ｗｉｎｓｌｏｗ　ｅｔ　Ｗｉｎｓｌｏｗ）Ｅｖａｎｓ］也具有一定　的抑菌效果　ｊ；龙柏精油还具有一定的杀虫活性，对　白蚁（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ　ｓｐｅｒａｔｕｓ　Ｋｏｌｂｅ）、小菜蛾［Ｐｌｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ（Ｌ．）］、土耳其扁谷盗［Ｃｒｙｐｔｏｌｅｓｔｅｓ　ｔｕｒｃｉｃｕｓ　（Ｇｒｏｕｖｉｌｌｅ）］和双条杉天牛（Ｓｅｍａｎｏｔｕｓ　ｂｉｆａｓｃｉａｔｕｓ　Ｍａｔｓｃｈ）具有熏蒸作用　。另外，龙柏枝叶中还含　有一些对多种食品微生物和植物病原真菌具有抑制　作用的活性成分　。但到目前为止，有关龙柏提取　物除草作用的研究尚未见报道。　植物在自然环境中生长时存在着相互竞争，某些　植物会分泌一些化学物质（又称化感物质）来抑制其　他植物的生长，从而形成优势种群。目前，从植物的　化感物质中寻找先导化合物进行模拟合成，是天然除　草剂研究的一个热点¨　。为寻找具有除草活性的天　然化合物，作者采用培养皿滤纸法测定了龙柏枝叶水　浸提液对反枝苋（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ　ｒｅｔｒｏｌｆｅｘｕｓ　Ｌ．）、油菜　（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．）、生菜（Ｌａｃｔｕｃａ　ｓａｔｉｖａ　Ｌ．ｖａｒ．　ｒａｍｏｓａ　Ｈｏｒｔ．）、番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　Ｍｉｌｌｅｒ）和　小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　Ｌ．）５种植物种子萌发以及幼　苗根长和茎高的抑制作用，并采用微量除草活性测定　方法测定了龙柏水浸提液的不同溶剂萃取物对番茄　种子萌发和幼苗根长和茎高的抑制作用，以期为植物　源除草剂资源的开发利用提供实验依据。　１　材料和方法　１．１材料　供试龙柏（Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ‘Ｋａｉｚｕｃａ’）枝叶于　２００９年３月采自青岛农业大学校园内，树龄５　ａ。龙　柏的枝叶洗净、晾干后备用。供试的番茄品种为‘菜　都９８２Ｆ１’（山东寿光金田种苗有限公司）、小麦品种　为‘烟农２３号’（山东鑫星种业有限公司）、生菜品种　为美国生菜‘大速生’（河北省禾亭双丰种业有限公　司）、油菜品种为‘四季青’（青岛市流亭良种推广　站），上述种子均购自城阳种子市场；反枝苋种子采　自青岛农业大学校园内。　１．２方法　１．２．１枝叶水浸提液的制备参考郑丽等¨　和程　月琴等　的方法制备龙柏枝叶水浸提液。称取龙柏　枝叶４００　ｇ，剪成长１　ｃｍ小段，用２　０００　ｍＬ蒸馏水常　温下浸泡４８　ｈ，３层纱布过滤，滤液即为质量浓度　０．２　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸提液原液；通过半量稀　释法，分别配成质量浓度为０．２、０．１、０．０５和０．０２５　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸提液处理液，于４℃冰箱中　保存、备用。　１．２．２枝叶水浸提液除草活性的生物测定参照高　兴祥等　和李育川等¨　的种子萌发法并略作改进，　测定龙柏枝叶水浸提液的除草活性。　在洗净、烘干的培养皿中铺１层灭菌滤纸，分别　加入１０　ｍＬ处理液（对照则加入１０　ｍＬ蒸馏水），将　经过５Ｏ℃～５５℃温水消毒的油菜、反枝苋、生菜、番　茄和小麦的种子放入培养皿中，置于２５℃恒温培养　箱内培养，每皿２０粒种子，每处理设３次重复。５　ｄ　后统计各植物种子的萌发率并计算种子萌发抑制率。　将油菜、反枝苋、生菜、番茄和小麦的种子消毒后　催芽至露白，放人铺有１层灭菌滤纸的培养皿中，分　别加入１０　ｍＬ处理液（对照则加入１０　ｍＬ蒸馏水），　置于２５℃恒温培养箱内培养，每皿２０粒种子，每处　理设３次重复。５　ｄ后测定各植物幼苗的根长和茎高　并计算根长和茎高的抑制率。　１．２．３枝叶水浸提液活性成分的萃取取４００　ｍＬ　龙柏枝叶水浸提液原液，依次用石油醚（分析纯，烟　台三和化学试剂有限公司）和乙酸乙酯各萃取３次，　每次溶剂用量均为４００　ｍＬ，合并相同溶剂萃取液，减　压浓缩后得到０．０３９　ｇ石油醚萃取物和０．０５１　ｇ乙酸　乙酯萃取物，水相减压浓缩后得到固形物０．４８１　ｇ。　分别用相应的溶剂配成质量浓度为０．０４、０．０２和　５２　植物资源与环境学报　第１９卷　０．０１　ｇ・ｍＬ　的萃取物处理液，备用。　萌发率］Ｘ１００％；根长（茎高）生长抑制率＝［（对照组　１．２．４　枝叶水浸提液萃取物除草活性的生物测定　根长或茎高一处理组根长或茎高）／对照组根长或茎　参照郝双红等　的微量除草活性测定方法并略作改　高］ｘｌＯ０％。　进，测定龙柏枝叶水浸提液萃取物的除草活性。将　使用Ｅｘｃｅｌ软件统计实验结果，并计算种子萌发　２　ｃｍｘ６　ａｍ滤纸条的长边垂直折起０．５　ＣＩＩ１，用微量进　和根长（茎高）抑制率的平均值及标准差，利用ＳＰＳＳ　样器分别将５０　萃取物处理液均匀滴加在滤纸条　软件对数据进行方差分析。　折边下面２　ｃｍｘ２．５　ａｍ部分，待溶剂挥发后，把滤纸　条的载药部位贴在规格为２．５　ｃｍｘ７．５　ｃｍ的载玻片　２结果和分析　上，每个载玻片平行贴２条滤纸条，间距１　ｃｍ，每处　理设３次重复。将载玻片放人铺有２层滤纸并已加　２．１　龙柏枝叶水浸提液除草活性的生物测定结果　入５　ｍＬ蒸馏水的培养皿（直径９　ｃｍ）中，使滤纸条未　２．１．１　对５种植物种子萌发率的影响龙柏枝叶水　受药部分与培养皿中的湿滤纸充分接触。在每个滤　浸提液对５种植物种子萌发的抑制率见表１。表１　纸条受药部分的前端（远离未受药部位的一端）放置　结果表明，龙柏枝叶水浸提液对５种植物种子的萌发　２０粒大小一致的番茄种子。将培养皿倾斜１５。（滤纸　均有一定的抑制作用，其中质量浓度较高的龙柏枝叶　条吸水端向下），放入２８℃培养箱中培养，９６　ｈ后统　水浸提液对供试植物种子萌发的抑制作用明显，质量　计各处理番茄种子的萌发率，测量番茄幼苗的根长和　浓度较低的龙柏枝叶水浸提液对植物种子萌发的抑　茎高，并计算种子萌发率、种子萌发抑制率及对根长　制作用不明显，甚至有一定的促进作用。０．２　和茎高的抑制率。　ｇ・ｍＬ。。龙柏枝叶水浸提液对油菜、反枝苋、生菜、番　１．２．５　除草活性成分的定性分析参照文献［１７］　茄和小麦种子的萌发抑制率分别为１００．００％、　的方法进行龙柏枝叶水浸提液除草活性成分的初步　１００．Ｏ０％、１００．００％、１００．００％和８１．８２％，抑制作用　鉴定。将龙柏枝叶水浸提液的乙酸乙酯萃取物用乙　明显；随着龙柏枝叶水浸提液质量浓度的减小，对供　酸乙酯配成质量浓度为０．叭ｇ・ｍＬ　的待测溶液，点　试植物种子萌发的抑制率不断降低，质量浓度为　样于硅胶薄层板上，用展开剂［　（乙酸乙酯）：Ｖ（石油　０．０２５　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸提液对油菜、生菜和　醚）：２：１］展开后，分别用质量体积分数１％三氯化　小麦种子萌发的抑制作用均很小，种子萌发抑制率分　铝乙醇溶液、质量体积分数５％三氯化铁甲醇溶液和　别为１．５６％、５．１７％和５．４５％。　质量体积分数０．０５％溴酚蓝乙醇溶液进行显色反　方差分析结果表明，龙柏枝叶水浸提液的不同质　应，并在紫外光下观察硅胶薄层板上的显色情况。　量浓度处理液对５种植物种子萌发的抑制作用差异　１．３数据处理　显著（Ｐ＜０．０５）。　种子萌发率、种子萌发抑制率和根长（茎高）生　２．１．２对５种植物幼苗茎高的影响龙柏枝叶水浸　长抑制率的计算公式分别为：种子萌发率＝（萌发种　提液对５种植物幼苗茎高的抑制率见表２。由表２　子数／供试种子数）×１００％；种子萌发抑制率＝［（对　可见，质量浓度为０．２、０．１和０．０５　ｇ・ｍＬ。。的龙柏　照组种子萌发率一处理组种子萌发率）／对照组种子　枝叶水浸提液对５种植物幼苗茎高的生长均有一定　表１不同质量浓度的龙柏枝叶水浸提液对５种植物种子萌发的抑制率（Ｘ￣ＳＤ）　）　Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ‘Ｋａｉｚｕｃａ’ｔｏ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　．，ｉｆｖｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ（Ｘ＋ＳＤｌ　质量浓　对不同植物种子萌发的抑制率／％　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｌｏ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｇ。乙ｏ“ｃ　“ｔｒ．　油菜　反枝苋　生菜　番茄　小麦　ａｔｌ。“　Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ　ｒｅｔｒｏｌｆｅｘｕｓ　Ｌａｃｔｕｃｎ　ｓⅡｔｉｖｎ　ｖａｒ．　ｒａｍｏｓｄ　Ｌｙｃｏｐｅ　ｉｃｏｎ　ｃ“ｌｅｎｔⅡｍ　Ｔｒｉｔｉｃ“ｍ　ｎ　ｔｉｖｕｍ　同列中不同的小写字母表示在５％水平上差异显著Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｎｍ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　５％ｌｅｖｅｌ　第１期　罗　兰等：龙柏枝叶水浸提液及其萃取物除草活性的生物测定　５３　的抑制作用。其中，质量浓度０．２　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝　他处理组对供试植物幼苗茎高生长的抑制作用均达　叶水浸提液对油菜、反枝苋、生菜、番茄和小麦幼苗茎　到显著水平（Ｐ＜０．０５）。　高生长的抑制率分别为９９．１７％、９８．０８％、１００．００％、　２．１．３对５种植物幼苗根长的影响龙柏枝叶水浸　１００．００％和９３．７３％，质量浓度０．１　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝　提液对５种植物幼苗根长的抑制率见表３。由表３可　叶水浸提液对上述５种植物幼苗茎高生长的抑制率　知，龙柏枝叶水浸提液对５种植物幼苗根长生长的抑　分别为９７．７６％、７６．４５％、１００．００％、１００．００％和　制作用不同，且随着水浸提液质量浓度的减小，抑制　３４．７６％。随质量浓度的减小，龙柏枝叶水浸提液对　率不断下降。质量浓度０．２　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸　供试植物幼苗茎高生长的抑制率也逐渐降低，质量浓　提液对５种植物幼苗根长生长的抑制率均在９１％以　度０．０２５　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸提液除对番茄幼苗　上；质量浓度０．１　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸提液对油　茎高有一定的抑制作用外，对其他４种植物的茎高生　菜、反枝苋、生菜和番茄幼苗根长生长的抑制率均在　长均表现出一定的促进作用。　９０％以上；质量浓度０．０２５　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸　　对上述结果进行方差分析，结果表明，除质量浓　提液对小麦幼苗根长的生长表现出一定的促进作用，度０．１和０．２　ｇ・ｍＬ　的龙柏枝叶水浸提液对油菜、　而对其他４种植物幼苗根长的生长则表现出不同程　生菜和番茄幼苗茎高生长的抑制率差异不显著外，其　度的抑制作用。　表２不同质量浓度的龙柏枝叶水浸液对５种植物幼苗茎高的抑制率（Ｘ￣ＳＤ）　）　Ｔａｂｌｅ　２　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓ￣‘Ｋａｉｚｕｃａ’ｔｏ　ｓｔｅｍ　ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ｛Ｘ￣ＳＤ）　质量浓　度　ｇ　『ｎｌ　Ｃｏ“ｃｅｎｔｒ　ｔ　０“　对不同植物幼苗茎高的抑制率／％　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｔｏ　ｓｔｅｍ　ｈｅｉｇｈｔ。ｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｐｅｅｉｅｓ　ｓｅｅｄ¨“ｇｓ　油菜　Ｂｒａｓ５ｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　反枝苋　生菜　番茄　小麦　Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ　ｒｅｔｒｏｆｌｅｘｕｓ　Ｌａｃｔｕｃａ　ｓａｔｉｖａ　ｖａｒ．ｒａｍｏｓａ　Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　同列中不同的小写字母表示在５％水平上差异显著Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　５％ｌｅｖｅｌ　表３不同质量浓度的龙柏枝叶水浸提液对５种植物幼苗根长的抑制率（Ｘ￣ＳＤ）　Ｔａｂｌｅ　３　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ‘Ｋａｉｚｕｃａ’ｔｏ　ｒｏｏｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ（Ｘ￣ＳＤ）　｝　质量浓　度／ｇ‘ｍＬ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　翌至　望　堕　堡　油菜　Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　兰　！　！竺　！竺竺！　竺！　！　！　！！：：竺：！：！　！　小麦　Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　反枝苋　生菜　番茄　Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ　ｒ￣ｔｒｏｌｅｘｕ８ｆ　Ｌａｃｔｕｃａ　ｓａｔｉｖａ　ｖａｒ．ｒａｍｏｓａ　Ｌ￣ｖｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　同列中不同的小写字母表示在５％水平上差异显著Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　５％ｌｅｖｅｌ　　方差分析结果显示，不同质量浓度的龙柏枝叶水　０．０２５　ｇ・ｍＬ。龙柏枝叶水浸提液（Ｐ＜０．０５）。浸提液对生菜和小麦根长生长的抑制作用均有显著　２．２龙柏枝叶水浸提液的不同溶剂萃取物除草活性　差异（Ｐ＜０．０５）；０．１和０．２　ｇ・ｍＬ　龙柏枝叶水浸提　的生物测定结果　液对油菜和番茄幼苗根长生长的抑制作用差异不显　龙柏枝叶水浸提液的石油醚、乙酸乙酯和水萃取　著，但与其他处理问均有显著差异（Ｐ＜０．０５）；０．０５、　物对番茄种子萌发以及幼苗根长和茎高生长的抑制　　ｇ・ｍＬ　０．１和０．２　ｇ・ｍＬ　龙柏枝叶水浸提液对反枝苋幼苗　率见表４。由表４可知，除质量浓度为０．０１根长生长的抑制作用差异不显著，但均显著高于　的龙柏枝叶水浸提液的水萃取物对番茄幼苗根长和　５４　植物资源与环境学报　第１９卷　茎高生长有一定的促进作用外，各溶剂萃取物均对番　高的抑制率均大于８３％。在龙柏枝叶水浸提液的３　水萃取物对番茄种子萌发和幼苗生　茄种子萌发和幼苗生长有一定的抑制作用。其中，石　种溶剂萃取物中，且质量浓度较低的水萃取物　油醚和乙酸乙酯萃取物对番茄种子萌发以及幼苗根　长的抑制率均最低，　ｇ・ｍＬ　）对番茄幼苗根长和茎高的生长则显　长和茎高生长的抑制率均高于水萃取物，且乙酸乙酯　（０．Ｏ１示出一定的促进作用。　萃取物的抑制作用较强。　质量浓度为０．０２和０．０４　ｇ・ｍＬ　的乙酸乙酯萃　分析结果表明，０．０４　ｇ・ｍＬ　石油醚萃取物以及　取物对番茄种子萌发及幼苗根长和茎高生长的抑制　０．０２和０．０４　ｇ・ｍＬ　乙酸乙酯萃取物对番茄种子萌　０．Ｏ１　率均为１００．００％；质量浓度为０．０１　ｇ・ｍＬ　的乙酸乙　发以及幼苗根长和茎高的抑制率均为１００．００％，酯萃取物对番茄种子萌发及幼苗根长的抑制率则有　ｇ・ｍＬ　乙酸乙酯萃取物对番茄幼苗茎高生长的抑制　００％，０．０２　ｇ・ｍＬ　石油醚萃取物对番茄　所下降，分别为６６．６７％和４０．００％。石油醚萃取物　率也为１００．的抑制作用低于乙酸乙酯萃取物，质量浓度为０．０４　幼苗茎高的抑制率也达到９９％以上，方差分析结果显　ｇ・ｍＬ　的石油醚萃取物对番茄种子萌发及幼苗根长　示上述处理间的差异均不显著，而其余处理组间番茄　和茎高的抑制率均为１００．００％；质量浓度为０．０２和　种子的萌发抑制率、幼苗根长抑制率和茎高抑制率均　０．Ｏ１　ｇ・ｍＬ　的石油醚萃取物对番茄种子萌发的抑制　有显著差异（Ｐ＜０．０５）。　率分别为６１．１１％和１６．６７％，对番茄幼苗根长和茎　表４龙柏枝叶水浸提液的不同溶剂萃取物对番茄种子萌发和幼苗生长的抑制率（Ｘ＋ＳＤ）　）　Ｔａｂｌｅ　４　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓ￣‘Ｋａｉｚｕｃａ’ｔｏ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　Ｍｉｌｌｅｒ（Ｘ￣ＳＤ）　’　’同列中不同的小写字母表示在５％水平上差异显著Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　５％ｌｅｖｅ１．　２．３龙柏枝叶水浸提液乙酸乙酯萃取物除草活性成　分的定性分析结果　３　讨　论　对龙柏枝叶水浸提液中除草活性较高的乙酸乙　酯萃取物所含的除草活性成分进行定性分析，初步鉴　除草剂生物活性的筛选方法较多，作者所选的供　定结果为：硅胶薄层板经质量体积分数１％三氯化铝　试植物种类均为除草剂生物活性测定中常用的敏感　采用的萃取物除草活性的测定方法属于微　乙醇溶液显色后，在紫外光下不显黄色荧光；经质量　种类¨　，体积分数５％三氯化铁甲醇溶液显色后，在紫外光下　量生物测定方法，在分离物质很少的情况下，能简便、　可观察到蓝绿色斑点；经质量体积分数０．０５％溴酚蓝　快速、灵敏地筛选出具有除草活性的化合物。本研究　乙醇溶液显色后，在蓝绿色底色上没有出现黄色斑　结果表明，龙柏枝叶水浸提液对５种植物的种子萌发　点。根据薄层层析的显色结果可以初步断定龙柏枝　以及幼苗根长和茎高的生长均有一定的抑制作用，说　叶水浸提液的乙酸乙酯萃取物中的主要除草活性成　明龙柏枝叶水浸提液含有除草活性成分；通过水浸提　分是酚类成分。　液的不同溶剂萃取物对番茄种子萌发以及幼苗根长　第ｌ期　罗　兰等：龙柏枝叶水浸提液及其萃取物除草活性的生物测定　５５　和茎高生长的抑制作用的测定，确定龙柏枝叶水浸提　ｓｐｅｒａｔｕｓ　Ｋｏｌｂｅ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２００５，５３（１１）：４３８８—４３９２．　液的乙酸乙酯萃取物的除草活性最高；初步定性分析　结果显示，龙柏枝叶水浸提液的乙酸乙酯萃取物所含　的主要除草活性成分为酚类成分。本研究结果为从　龙柏枝叶中寻找除草活性物质奠定了研究基础。　植物体内的化学成分非常复杂，生物活性也多种　多样。一般来说，植物提取物的除草活性并非为单一　化合物的作用结果，而很可能是几种或几类化合物共　［６］　赵晓燕，侯有明．龙柏精油对小菜蛾的生物活性［Ｊ］．昆虫知　识，２００６，４３（１）：５７—６０．　［７］　曾建德．龙柏精油对土耳其扁谷盗的熏蒸作用［Ｊ］．湘潭师范学　院学报：自然科学版，２００７，２９（４）：１２４—１２６．　［８］　郝德君，王焱，马凤林．龙柏挥发油的化学成分及其对双条　杉天牛生物活性研究［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００８，２０（４）：　６００－６０３．　同作用的结果　。本研究只对龙柏枝叶水浸提液的　乙酸乙酯萃取物的化学成分进行了初步定性分析，其　中所含的具体活性成分还需进行深入的分析和鉴定。　另外，龙柏枝叶水浸提液的石油醚和水萃取物也具有　一定的除草活性，其中的除草活性成分也值得进行进　一步的深入分析研究。　龙柏是常见的园林绿化树种之一，多用于庭园美　化，每年都需要进行１～２次树形修剪，因此可产生许　多枝叶，若能直接应用龙柏枝叶作为植物源除草剂，　不但可以变废为宝，还能产生巨大的经济效益和社会　效益。　参考文献：　：１］　张正香，罗小龙，宋红，等．柏树综合利用研究概况［Ｊ］．林　产化工通讯，１９９９，３３（２）：２９—３１．　２］　张义，明军．圆柏（Ｓａｂｉｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌｉｎｎ．）Ａｎｔ．）的品种分　类［Ｊ］．湖北农学院学报，２００１，２１（１）：２５—２８．　［３］蒋继宏，李晓储，高甜惠，等．几种柏科植物挥发物质及抗肿瘤　活性初步研究［Ｊ］．福建林业科技，２００６，３３＜２）：５２—５７．　［４］　崔艳秋，南蓬，林满红，等．园柏和龙柏主要挥发物及其抑菌　和杀菌作用［Ｊ］．环境与健康杂志，２００６，２３（１）：６３－６５．　［５］Ｐａｒｋ　Ｉ　Ｋ，Ｓｈｉｎ　Ｓ　Ｃ．Ｆｕｍｉｇａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌｓ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｇａｒｌｉｃ（Ａｌｌｉｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ）ａｎｄ　ｃｌｏｖｅ　ｂｕｄ（Ｅｕｇｅｎｉａ　ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｔａ）ｏｉｌｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　ｔｅｒｍｉｔｅ（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ　［９］李传仁，严赞开．龙柏叶提取物对食品抑菌作用研究［Ｊ］．安徽　农业科学，２００５，３３（２）：２９４，２９９．　［１Ｏ］　牛新威，罗兰，董艳丽，等．龙柏茎叶粗提物对植物病原真　菌的抑制作用［Ｊ］．内蒙古农业科技，２００８（４）：５７－５８．　［１１］　李效飞．治理杂草的天然化合物［Ｊ］．世界农药，２０００，２２（３）：　２０－２４．　［１２］　郑丽，冯玉龙．紫茎泽兰叶片化感作用对１Ｏ种草本植物种　子萌发和幼苗生长的影响［Ｊ］．生态学报，２００５，２５（１０）：　２７８２－２７８７．　［１３］程月琴，王红卫，郑红军，等．入侵植物斑地锦浸提液对几种　蔬菜的化感作用研究［Ｊ］．中国农学通报，２００９，２５（２）：８１—　８４．　［１４］　高兴祥，李美，高宗军，等．泥胡菜等８种草本植物提取物　除草活性的生物测定［Ｊ］．植物资源与环境学报，２００８，１７　（４）：３１—３６．　［１５］李育川，郭巧生，邵清松，等．小桐子提取物除草活性的生物　测定［Ｊ］．植物资源与环境学报，２００９，１８（４）：７２—７８．　［１６］郝双红，魏艳，张璩，等．中国粗榧枝叶提取物分离及其　对反枝苋的除草活性［Ｊ］．农药学学报，２００６，８（１）：９１－９４．　［１７］周乐．有机化学实验［Ｍ］．西安：世界图书出版公司，２０００：　２６６－２７３．　［１８］吴文君．植物化学保护实验技术导论［Ｍ］．西安：陕西科学技　术出版社，１９８８．　［１９］　毛燕，黄必恒．龙柏叶总黄酮提取条件的研究［Ｊ］．浙江林　学院学报，２０００，１７（１）：１０２－１０５．