—— －丝毫，。■，‘ｌⅡ了—Ｉ ｄｏｉ：１０．１３３６０／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－８１０１．２０１４．０６．０１６ 异樟叶精油的抑茵活性及其化学成分 胡文杰 ，李冠喜 ，曹裕松 ，柯坫华 ，周升团 （１．井冈山大学生命科学学院，江西吉安３４３００９；２．连云港市农业科学院） 摘 要：运用水蒸汽蒸馏法提取异樟叶精油，采用平板抑菌法检测精油对真菌的抑菌活性，并利用气一质（ＧＣ／ ＭＳ）联用技术分析精油的化学成分。结果表明：畀樟叶精油对尖孢镰刀茵、七叶树壳梭孢和拟茎点霉均具有抑制 效果，抑茵率分别达到４２．６４％，５７．５０％和６４．３０％，对拟茎点霉的抑制效果最好；从异樟叶精油中鉴定出４１种物 质，包括烯烃类物质２０种，酮类物质１种，酯类物质３种，醚类物质３种，氧化物类物质１种和醇类物质１３种。 关键词：异樟；精油；抑茵活性；化学成分 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｃｉｎｎａ． ｍｕｍ ｃａｍｐｈｏｒａ ｉｓｏｎｅｒｏｌｉｄｏｌ ｔｙｐｅ／／／ＨＵ Ｗｅｎｊｉｅ，ＬＩ Ｇｕａｎｘｉ，ＣＡＯ Ｙｕｓｏｎｇ，ＫＥ Ｄｉａｎｈｕａ，ＺＨＯＵ Ｓｈｅｎ￣ｕａｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｉｓｏｎｅｒｏｌｉｄｏｌ ｔｙｐｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｓｔｅａｍ ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｏｎ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｐｌａｔｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｅｔｈｏｄ．ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ０ｉｌ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｉｓｏｎｅｒｏｌｉｄｏｌ ｔｙｐｅ ｗａｓ ｇｏｏｄ ｏｎ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍ，Ｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ ａｅｓｃｕｌｉ ａｎｄ Ｐｈｏｍｏｐｓ￣ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ，ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｕｐ ｔｏ ４２．６４％，５７．５０％ａｎｄ ６４．３０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ ｏｎ Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ ｔｈａｎ ｏｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｆｕｎｇｉ．Ｆｏｒｔｙ ｏｎｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｉｎ— ｃｌｕｄｉｎｇ ２０ ｏｌｅｆｉｎｓ，１ ｋｅｔｏｎｅ，３ ｅｓｔｅｒｓ，３ ｅｔｈｅｒｓ，１ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ １３ ａｌｃｏｈｏｌｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｉｓｏｎｅｒｏｌｉｄｏｌ ｔｙｐｅ；ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ；ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ Ｆｉｒｓｔ ａｕｔｈｏｒ’Ｓ ａｄｄｒｅｓｓ：Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊｉｎｇｇａｎｇｓｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉ’ａｎ ３４３００９，Ｊｉａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ 樟树（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｍｐｈｏｒａ（Ｌ．）Ｐｒｅｓ１．）系樟科 较强的抑菌活性。 樟属植物，是我国亚热带常绿阔叶林的主要树种之 为此，本研究对异樟叶精油进行化学成分分析和 一，分布于及华东南部等长江流域以南地区 Ｊ， 相应的抑菌试验，从而寻找出其中的高抑性精油成 生长于亚热带土壤肥沃的向阳山坡、谷地及河岸平 分，为今后医药、化工、食品以及新型防腐、防霉剂的 地。樟树的叶、根、茎和果等均富含精油，精油中的化 研制提供依据。 学成分，如单萜、倍半萜以及苯的衍生物是我国用量 １材料与方法 较大的传统天然香料，也是重要有效药用成分 Ｊ，这 １．１ 试验材料 些化学成分被广泛应用于香精香料、医药、化工、食品 １．１．１ 异樟叶的采集与处理 和烟草等工业。 异樟叶于２０１２年７月中旬采自江西省林科院内 根据樟树枝叶精油中所含主成分的不同，可把樟 的成年树。随采随蒸，采用水蒸气蒸馏法提取精油， 树划分成异樟（异一橙花叔醇）、脑樟（主含樟脑，下 其得油率约为０．４９％，用无水硫酸钠干燥后保存在 同）、芳樟（芳樟醇）、油樟（桉叶油）和龙脑樟（右旋 棕色瓶中，４ ｃＩＣ冷藏，备用。 龙脑）５种化学型 Ｊ。有关樟树提取物的化学成分分 １．１．２供试菌株与培养基 析和抑菌活性的研究已有相关报道 ｊ，但分化学型 供试的植物病原真菌为尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ 研究樟树挥发油的抑菌效果目前尚未见报道。异樟 ｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍ）、七叶树壳梭孢（Ｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ ａｅｓｃｕｌｉ）和拟 叶含有精油，经过初步的抑菌试验，发现叶精油具有 茎点霉（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ），均由南京林业大学 收稿日期：２０１４－０５＿０４ 修回日期：２０１４＿ｏ８－０７ 提供。 基金项目：吉安市科技支撑项目（吉市科计字［２０１３］ｌ８号２２）；井冈 供试培养基为综合马铃薯培养基（ＺＰＤ）：马铃薯 山大学博士科研启动项目（ＪＺＢ１３０９）。 作者简介：胡文杰（１９７４一），男，讲师，从事植物资源开发利用研究。 ２００ ｇ，葡萄糖２０ ｇ，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １．５ ｇ，ＫＨ２ＰＯ４ ３ ｇ， 李冠喜为并列第一作者。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕｗｅｎｊｉｅ２００８＠１２６．ｃｏｍ ＶＢｌ ０．０５ ｇ，琼脂２０ ｇ，蒸馏水１ ０００ ｍＬ。 林业科技开震２０１４年第２８卷第６期 应用研１．２究 试验方法 将病原菌菌丝块接种到培养皿，重复３次，２５℃恒 温培养４ ｄ后观察拍照，计算抑菌率。其中，接种在对 照平板上的病原菌菌落平均直径为Ｄ ，接种在含异 １．２．１异樟叶精油化学成分的测定 Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｃｌａｍｓ ６８０型气相色谱仪，色谱柱 为Ｅｌｉｔｅ一５ＭＳ，石英毛细管柱为（３０ Ｉｌｌ×０．２５ ｍｍ× ０．２５ ｍ）。气相色谱条件：进样口温度２８０ ｃｃ，柱温 ５Ｏ℃保持２ ｍｉｎ，以３￣Ｃ／ｍｉｎ升至１４０ ｏＣ，保持２ 樟叶精油平板上的病原菌菌落平均直径为Ｄ ，则 ，）一Ｄ 抑菌率＝ ２结果与分析 —兰×１００％。 ０ ｍｉｎ，再以１５￣Ｃ／ｍｉｎ升至２８０℃保持１０ ｍｉｎ，共运行 ５３ ｍｉｎ。载气为Ｈｅ，流速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，进样量０．５ Ｌ，分流比１０：１。 ２．１ 异樟叶精油的化学成分 采用气一质（ＧＣ／ＭＳ）联用技术分析异樟叶精油 的化学成分，从中分离并鉴定出了４１种化学成分，占 总成分的９２．７７％。主要化合物类别为：烯烃类化合 物２０种，占总成分的９．２２％；酮类化合物１种，占总 Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｃｌａｍｓ ６００Ｃ型质谱仪，质谱分析条 件：ＥＩ离子源温度１８０ ｏＣ，接口温度２６０。【二，扫描范 围５０—６００ ｍ／ｚ。 数据处理与质谱检索采用Ｎｉｓｔ谱库、文献检索 和人工解析等联合方法，鉴定和确认各成分，经色谱 峰面积归一法，计算各组分的相对含量。 １．２．２异樟叶精油对真菌的抑菌活性测定 取异樟叶精油１，３，５ ｍＬ与２５ ｍＬ ＺＰＤ混合倒平 成分的０．６６％；酯类化合物３种，占总成分的 ２３．４６％；醚类化合物３种，占总成分的１２．１７％；氧 化物类化合物１种，占总成分的１．６５％；醇类化合物 １３种，占总成分的４５．６１％。在这些化学成分中，醇 类化合物含量较高，主要为１，８一桉叶油素、 一松油醇 和异一橙花叔醇；其次是酯类化合物，主要为三甲 基一２一丁烯酸环丁酯；最低的是酮类化合物（表１）。 化合物 左旋乙酸龙脑酯 黄樟油素 Ｂ一波旁烯 异丁香烯 板，制得异樟叶精油浓度为１：２５，３：２５和５：２５（体积 比）的ＺＰＤ培养基，并以纯ＺＰＤ倒平板作对照。分别 序号 ｌ ２ ３ ４ 表１ 异樟叶精油主要化学成分 化合物 侧柏烯 ＯＬ一蒎烯 莰烯桧烯 保留时伺ａｉｒｎ 相 且／相似度／％ 序号 ８６ ８９ ８９ ８７ 保留帅／丰 ａｒ量／相似 ｉｎ７．４３ ７．６６ ８．２５ ９．１４ ０．３４ ２．３４ １．３６ ０ １２ ２２ ２３ ２４ ２５ ２３．０５ ２４．８１ ２６．９４ ２７．２３ ０．０８ ０．８２ ０．０７ ０．３９ ８７ ８９ ８５ ８９ ５ ６ ７ ８ ９ 一水芹烯 ５，８－二乙基十二烷 柠檬烯 １，８－桉叶油素 罗勒烯 ９．３０ ９．８３ １１．４３ ｉ１．５９ １２ ２２ ０．８Ｏ ０．０６ ０．４０ ９．７６ ０．０５ ９７ ８６ ９０ ９５ ８５ ２６ ２７ ２８ ２９ ３０ 甲基丁香酚 ｎ一石竹烯 Ｂ一榄香烯 大根香叶烯Ｄ Ｂ一桉叶烯 ２７．８５ ２８．４０ ２８．８９ ３０．９０ ３１．３３ １ ６０ ０．８５ ０．１３ ０．２８ ０．０５ ７９ ８７ ９２ ９０ ８５ １Ｏ １１ １２ （ｚ）一氧化芳樟醇 （Ｅ）一氧化芳樟醇 十一烷 １３．５７ １４．６５ １４．７１ ０．５３ ０．２６ ０．０７ ９１ ８９ ９３ ３１ ３２ ３３ 异丁香酚甲醚 榄香烯 杜松烯 ３１．８３ ３４．１４ ３４ ２２ ９．７５ ０．２１ ０．２３ ９２ ７８ ８４ １３ １４ １５ １６ １７ 芳樟醇 ２，６－二甲基一１，３，５，７－辛四烯 Ｐ一伞花烃 樟脑 ３一辛烯－２一醇 １４．８６ １５．５９ １５．９６ １６，８５ １７．１２ ０．３６ ０．５７ ０．６３ ０．６６ ０．３５ ９２ ８４ ９４ ８２ ９２ ３４ ３５ ３６ ３７ ３８ 异一橙花叔醇 匙叶桉油烯醇 石竹烯氧化物 桉叶油－７（１１）一烯＿４一醇 桧脑 ３４．４３ ３４．８４ ３５．０８ ３５．３４ ３６．７０ ２８．８ｌ １．９７ １．６５ ０ ６７ ０．２２ ９３ ８７ ８６ ７６ ９２ ｌ８ １９ 萜品醇４ 一松油醇 ｌ８．０４ １８．９１ ０．１３ １．８５ ８９ ９０ ３９ ４Ｏ 特戊酸＿６一柠檬酯 反式一ｚ一环氧红没药烯 ３７．１６ ３７．２５ ０．１３ ０．２７ ８５ ８３ ２Ｏ ２１ 顺式－２一Ｃｇｒｅｎ－４一醇 Ｂ一香茅醇 ２０．４５ ２０．４９ ０．３７ ０．３３ ８６ ９５ ４１ 三甲基 一丁烯酸环丁酯 ３７．７５ ２Ｏ．２５ ７９ ２．２异樟叶精油对真菌的抑菌活性 平板抑制效果如表２和图１所示。异樟叶精油 表２异樟叶精油对３种植物病原真菌的抑菌活性／％ 对尖孢镰刀菌、七叶树壳梭孢和拟茎点霉均具有一定 的抑制效果，且随着异樟叶精油浓度的增大，抑制效 果更加明显。浓度为１：５时对病原菌的抑制效果均 ７Ｏ 林业科技开发２０１４年第２８卷第６期
